WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 


Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Содержание и синтез цитокинов при псориазе

-- [ Страница 2 ] --

Материалом для исследования служили образцы кожных биоптатов, полученных методом punch-биопсии от пациентов, страдающих псориазом, из участков визуально неповрежденной кожи и из бляшечных элементов. Punch-биопсия производилась с помощью одноразового стерильного пробойника диаметром 3мм (Stumpp Medizintechnik GmbH, Германия). Всем пациентам проводилось определение экспрессии мРНК хемокинов CCL3/MIP-1, CCL4/MIP-1, CCL5/RANTES, CCL11/eotaxin, CCL24/eotaxin-2, CXCL8/IL-8 и их рецепторов CCR1, CCR3, CCR5, CXCR1, CXCR2 и мРНК FOXP3 с помощью постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) с предварительной обратной транскрипцией. Реакционная смесь для ПЦР содержала следующие компоненты: 5x ПЦР-буфер (Амплисенс, Москва), деионизированная вода – до 20 мкл, праймеры (от 0,05 до 0,3 µM) производства «Синтол» (Москва), ДНК-Taq полимеразу («ДНК-Технология, Москва», 1,0 ферм.ед. в пробе) и мРНК (7,5 мкл в пробе), в общем объеме 10 мкл. ПЦР проводили в амплификаторе ICycler (Bio-Rad, США). Режим ПЦР: денатурация ДНК при 95°С – 4 мин., 30 циклов амплификации (95°С – 30 с., 60°С – 30 с., 72°С – 30 с.), элонгация 72°С – 7 мин. Визуализацию полученных ПЦР-продуктов осуществляли в 1,5 % агарозном геле, окрашенным бромистым этидием, при УФ освещении на трансиллюминаторе «Волна» (Россия). Полуколичественную оценку проводили с помощью программы Gel-Pro, принимая за 100 % интенсивность флюоресценции -актина. Мультиплексное определение панели цитокинов IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, GM-CSF, TNF- (проводилось в сыворотке и моче 52 больных псориазом), а у 10 пациентов в сыворотке крови определялись: IL-1, IL-1, IL-12 (p40), IL-12(p70), IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, TNF-, TNF-, TRAIL, MIF, IL-10, IL-1RA, IL-2, IL-2R, IFN-2, IFN-, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-13, LIF, FGFbasic, SCGF, PDGF-BB, -NGF, VEGF, HGF, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-3, IL-7, ICAM-1, VCAM-1, SCF, CCL2/MCP-1, CCL3/MIP-1, CCL4/MIP-1, CCL5/RANTES, CCL7/MCP-3, CCL11/eotaxin, CCL27/CTACK, CXCL1/GRO, CXCL8/IL-8, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL12/SDF-1 с использованием коммерческих наборов и прибора BIO-Plex («BIO-RAD», США).

Статистическая обработка результатов проводилась с помощью программы «Statistica 6.0» (StatSoft, США). Две группы независимых переменных сравнивались U-тестом Вилкоксона-Манна-Уитни. При отсутствии нормального распределения переменных использовалась ранговая корреляция по Спирмену. Достоверными считались различия между группами при р < 0,05, что является стандартным уровнем для медико-биологических исследований.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Содержание цитокинов в сыворотке крови и в моче больных псориазом

Первоначально у 10 пациентов было определено содержание 50 цитокинов. Эти цитокины, в зависимости от функциональной активности, были разделены на провоспалительные, противо-воспалительные, цитокины, продуцируемые Th1- и Th2-клетками, ростовые и иммуногемопоэтические факторы, адгезионные молекулы.

Было показано, что в сыворотке крови больных псориазом повышены значения провоспалительных цитокинов IL-1, IL-12 (p40), IL-16, IL-18, IL-2R, IFN-2, IL-9, IL-13 и LIF в группах с индексом PASI до 10 и более 20 по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,01). Выявленный уровень IL-18 и IL-2R в сыворотке крови у больных псориазом с индексом PASI более 20 был достоверно повышен по сравнению с больными с индексом PASI менее 10, напротив, уровни IL-1 и IL-16 были повышены у пациентов с индексом PASI менее 10 по сравнению с пациентами с индексом PASI более 20 (p < 0,005). Среди противовоспалительных цитокинов не были выявлены достоверные различия между больными псориазом и практически здоровыми лицами, а также различия между группами. Среди цитокинов, продуцируемых клетками Th1-типа, было выявлено повышенное значение IFN- в группе с индексом PASI менее 10 по сравнению с группой с индексом PASI более 20 (p < 0,05). По содержанию цитокинов, продуцируемых клетками Th2-типа, было выявлено повышенное значение IL-5 в группе с индексом PASI менее 10 и более 20 по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,01). Не было выявлено различий по концентрации цитокинов, продуцируемых клетками Th2-типа, между группами с индексом PASI менее 10 и более 20. Было выявлено, что в сыворотке крови больных псориазом достоверно увеличены значения: CCL4/MIP-1, CCL7/MCP-3, CCL11/eotaxin, CCL27/CTACK, CXCL9/MIG и CXCL12/SDF-1, как в группе с индексом PASI менее 10, так и в группе с индексом PASI более 20 по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,01). Также было показано, что в сыворотке крови больных псориазом с индексом PASI менее 10 достоверно повышено содержание CXCL10/IP-10 по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,01). Выявленный уровень CCL7/MCP-3 и CCL27/CTACK в сыворотке крови у больных псориазом с индексом PASI более 20 был достоверно повышен по сравнению с больными с индексом PASI менее 10, а уровень CXCL1/GRO был повышен у пациентов с индексом PASI менее 10 по сравнению с индексом PASI более 20 (p < 0,005). В ходе настоящей работы было установлено, что у пациентов с псориазом по сравнению с практически здоровыми лицами достоверно повышено значение цитокинов, относящихся к ростовым факторам: SCGF, beta-NGF (p < 0,01). Были выявлены повышенные значения факторов иммуногемопоэза (G-CSF, M-CSF и IL-3) и повышенные значения ICAM-1 в сыворотке крови больных псориазом с индексом PASI до 10 и более 20 по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,01). Уровни IL-3 и ICAM-1 в сыворотке крови у больных псориазом с индексом PASI более 20 были достоверно повышены по сравнению с больными с индексом PASI менее 10, а уровень HGF был повышен у пациентов с индексом PASI менее 10 по сравнению с индексом PASI более 20 (p < 0,005).





Скрининговое исследование уровня продукции 50 цитокинов в сыворотке крови больных псориазом выявило разноплановые изменения цитокинового профиля. В связи с этим были выбраны 8 основных цитокинов (IL-2, IL-6, TNF-, IL-10, IFN-, IL-4, GM-CSF и IL-8), участвующих в патогенезе псориаза, и были исследованы их концентрации у 52 пациентов. При оценке уровня цитокинов было отмечено статистически значимое увеличение содержания провоспалительных цитокинов: IL-2, IL-6, GM-CSF, IFN- и TNF- в сыворотке крови у больных псориазом по сравнению с практически здоровыми лицами (р < 0,01). Было установлено, что у больных псориазом повышено содержание цитокинов (GM-CSF и IFN-) в сыворотке крови по сравнению с атопическим дерматитом (p < 0,01). Было выявлено, что содержание GM-CSF в сыворотке крови больных псориазом без поражения суставов повышено, а IL-8 снижено по сравнению с сывороткой, полученной от пациентов с атопическим дерматитом (р < 0,01). В настоящей работе было показано, что у пациентов с атопическим дерматитом в сыворотке крови повышены значения IL-6, IFN- и TNF- по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,01).

При исследовании уровня цитокинов в моче больных псориазом выявлена повышенная концентрация противовоспалительного цитокина – IL-10, а также выявлено увеличение провоспалительных цитокинов (GM-CSF, IFN- и TNF-) по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,05). Выявлено повышенное содержание цитокинов IL-2, IL-4 и IL-8 в моче больных псориазом по сравнению с больными со склеродермией (р < 0,01). Было установлено, что у больных псориазом в моче повышено содержание GM-CSF и IFN- по сравнению с пациентами с атопическим дерматитом. Были выявлены повышенные значения в моче IL-10 и GM-CSF у больных псориазом (без поражения суставов) и сниженные значения IL-8 по сравнению с пациентами с атопическим дерматитом; и у пациентов с поражением суставов выявлены повышенные значения IL-10 и GM-CSF по сравнению с пациентами со склеродермией (р < 0,01).

Было выявлено, что у больных псориазом без поражения суставов повышена концентрация IL-2 и IL-8 и у больных псориазом с поражением суставов повышены значения IL-2 и IL-4 в моче по сравнению с пациентами со склеродермией (р < 0,01).

В группе с максимальной активностью псориатического воспаления (индекс PASI более 20) выявлено увеличение провоспалительного цитокина – IL-2 в сыворотке крови по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,001). В двух группах с индексом PASI менее 10 и индексом PASI более 20 выявлено увеличение GM-CSF в сыворотке крови по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,001). Показано, что у пациентов с индексом PASI более 20 в сыворотке крови повышены значения IL-2, IL-6, IL-8, IL-10 и GM-CSF по сравнению с пациентами с индексом PASI менее 10 (p < 0,01). Также выявлено повышенное содержание IL-2 в сыворотке крови в группе с индексом PASI более 20 по сравнению с индексом PASI от 10 до 20 (p < 0,01). Определение уровня цитокинов в моче в зависимости от тяжести и распространенности кожного поражения показало повышенные значения IL-10, GM-CSF, IFN- во всех трех группах по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,001). В группе пациентов с индексом PASI менее 10 выявлено достоверно повышение TNF- по сравнению с практически здоровыми лицами (p < 0,007). Было выявлено повышенное значение IL-8 в группе с индексом PASI более 20 по сравнению с индексом PASI менее 10 (p < 0,05).

Таблица 1. Концентрация цитокинов в сыворотке крови больных псориазом, пациентов со склеродермией, атопическим дерматитом и практически здоровых лиц Концентрация цитокинов в сыворотке крови (пг/мл), Me (min-max): TNF- 1,4 (0-11,3)* 0,4 (0-21,1) 0,6 (0-11,3) 0,3 (0,2-8,2) 0,4 (0,4-1,9)* 0,1 (0-1,2) *-достоверность различий показателя по сравнению с практически здоровыми лицами, (p < 0,05) -достоверность различий показателя по сравнению с пациентами с атопическим дерматитом, (p < 0,01) (критерий Вилкоксона-Манна-Уитни).
IFN- 7,3 (0-75,3)* 1,9 (0-12,2) 4,7 (0-75,3) 2,3 (1,4-8,3) 3,5 (0,3-5,3)* 0 (0-1,1)
GM-CSF 7,3 (0-25,0)* 4,1 (0-10,7)¤ 0,8 (0-25,0) 1,4 (0,2-9,7)* 0,4 (0-0,8) 0 (0-3,7)
IL-10 0,1 (0-355,3) 0 (0-4,3) 0,9 (0-7,0) 0 (0-3,6) 0,1 (0-1,8) 0 (0-0,9)
IL-8 0,5 (0-200,7) 0,37 (0-21,5) 0,8 (0-51,5) 0,9 (0,4-7,1) 1,3 (0,5-26,2) 1,0 (0-2,4)
IL-6 2,4 (0-86,5)* 0,4 (0-15,4) 5,9 (0-86,5) 3,0 (0,3-25,5)* 1,3 (0,4-6,5)* 0 (0-0,1)
IL-4 0 (0-159,8) 0 (0-18,9) 0 (0-111,8) 0 (0-19,3) 1,1 (0-4,5) 0 (0-1,6)
IL-2 0,1 (0-106,2)* 0 (0-5,5) 0,5 (0-106,2) 0,1 (0,-15,8)* 0,2 (0-1,3) 0 (0-0)
Группа обследованных Псориаз (группа в целом) (n = 52) - псориаз без поражения суставов (n = 18) -псориаз с поражением суставов (n = 34) Склеродермия (n = 10) Атопический дерматит (n = 10) Практически здоровые лица (n = 10)


Pages:     | 1 || 3 | 4 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.