WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 17 |

Исследованияаутоантител к ферментамантиоксидантной системы ипуринового метаболизма убольныхревматоиднымартритом

-- [ Страница 6 ] --

После взаимодействиякаждого фермента с соответствующимичистыми антителами было выявлено снижениеферментативной активности СОД, ГР, КАТ, ЦП,АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА различной степени выраженности(см. таблицу7). Следует отметить,что изменение ферментативной активностиизучаемых энзимов было различным прииспользовании растворимой ииммобилизированной форм ферментов. Так,например, активность растворимой формы5'-НТ после взаимодействия соспецифическими(«чистыми») Ат снизилась менеечем на 40%; различия с контрольной группой(физиологический раствор) и донорамидостоверны (р=0,008 и р=0,046,соответственно). Уменьшение активностииммобилизированной формы 5'-НТ по сравнениюс исходнымизначениями произошлопочти в2 раза;выявлены статистически достоверные различия сфизиологическим раствором(р=0,0007) и донорами (p=0,0077).Сходная картина наблюдалась и приизучении влияния специфических Ат на активностьрастворимой и иммобилизированнойформ СОД, ГР, КАТ, ЦП,АДА иПНФ. Ферментативная активностьиммобилизированной ГДА практическиполностью ингибировалась специфическими Ат (p<0,0001), в отличие отрастворимой формы фермента, прииспользовании которой хотя и наблюдалосьснижение активности, но не стольсущественное (p<0,0012).

Совершенно другаякартина наблюдалась при изучении влиянияспецифических иммуноглобулинов на активность КО. Такактивность растворимой формы КО послевзаимодействия со специфическими(«чистыми») Ат увеличилась незначительно (р=0,151);различия с контрольной группой(физиологический раствор) и донорамистатистически не достоверны (р=0,067 ир=0,071, соответственно). Увеличениеактивностииммобилизированной формы КО по сравнению сисходными значениями произошло в среднем на 25-30%(р=0,047); выявлены статистически достоверныеразличия с физиологическим раствором (р=0,044) идонорами (p=0,024) (см. таблицу 7).

Включение фермента впространственную решеткуполиакриламидного геля,составляющего основу ИГАП, (иммобилизированная форма)придает антигену (ферменту) новые свойства,благодаря которым он приобретаетопределенные преимущества перед растворимойформой. Такой метод приводит квозникновению незначительных конформационныхизменений,сохраняющих активность фермента, но, в тоже время, способствующих, например,экспрессии гидрофобных участков молекулыэнзима, содержащих «скрытые эпитопы».

Параллельно виммуноферментном методе были исследованысыворотки крови больных РА (n=30 для каждой серии опытов)на наличие антител к СОД, ГР,КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО после взаимодействия соспецифическим магнитоуправляемым сорбентом,в результате которого исходнаяконцентрация антител к ГР,КАТ, ЦП,5'-НТ и ПНФ уменьшилась в2,5 2,8 раза, а уровеньАт к СОД, АДА, ГДА снизился почти в 3,2 –4 раза (см. рисунок 4).

 <strong>Рисунок 4.Содержание антител к 5'-НТ,ПНФ, ГДА в сыворотке -2

Рисунок 4.Содержание антител к 5'-НТ,ПНФ, ГДА в сыворотке кровибольных РА послевзаимодействия со специфическиммагнитоуправляемым сорбентом.

ЦИК, осажденные изсывороток больных РА былиресуспензированы до 1 мг/мл. Выделенные ЦИКвызывали торможение реакциисупероксидзависимого восстановления нитросинеготетразолия. Выявляемая СОД–активность ЦИКсоставила32 9,6 Ед/мл.Было проведеноисследование СОД-активности ЦИК в плазмебольных РА.При воздействии на плазму смесью этанола,хлороформа и KH2PO4 cцелью осаждения компонентов крови,препятствующих определению СОД, былополучено, что исходный уровень ЦИКуменьшился в 2 раза.После осаждения ЦИК в супернатанте плазмы 7% ПЭГконцентрация белка составила 85221,1 мкг/мл, а СОД–активность – 2,40,35 Ед/мл. Это активностьциркулирующих иммунных комплексов, составкоторых может быть различен у больныхРЗ, в томчисле и СОД–Ат.Сохранение значительной активности растворимойформы СОД можно связать с проявлениемСОД–активности образовавшихсяиммунных комплексов (СОДраст.–Ат).

Полученные результатыдемонстрируют в основном ингибирующеевлияние специфических иммуноглобулинов наферментативную активность изучаемыхэнзимов. Темне менее, антиферментные Ат, как правило,специфичны не по отношению к активному центруэнзима, а по отношению к белку в целом. Еслиантигенные детерминанты фермента расположены вне егоактивного центра, то последний и в фермент-антиферментном комплексеможет оставаться доступным для субстрата(например, 5'-НТ и ПНФ). Вслучае, когда участки фермента, от которыхзависят его антигенные свойства, частичнозахватывают и область активного центра(например, КАТ и ГДА),антиферментможет выступать в качестве ингибитора,конкурирующего с субстратом.

СОДЕРЖАНИЕ АНТИТЕЛ КСОД, ГР, КАТ,ЦП,АДА,5'-НТ, ПНФ, ГДАи КО ВКОНТРОЛЬНЫХГРУППАХ

Содержание антител кСОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО уздоровых лиц

Содержание Ат к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА иКО определялось в сыворотке30 практически здоровых людей ианализировалось в зависимости от пола ивозраста. Дескриптивные статистики исходныхпоказателей уровня антител к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА,5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО у здоровых лицпредставлены в таблице 8.

Таблица 8.

Уровни антител к СОД,ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО у здоровыхлиц

Показатель M SD m 95% ДИ дляМ Me Mo IQR
Ат к СОД 0,060 0,022 0,004 0,052…0,068 0,064 0,064 0,033
Ат к ГР 0,055 0,020 0,004 0,048…0,062 0,054 Multiple 0,026
Ат к КАТ 0,067 0,019 0,004 0,060…0,074 0,072 0,075 0,031
Ат к ЦП 0,022 0,014 0,003 0,017…0,027 0,017 0,017 0,019
Ат к АДА 0,026 0,014 0,003 0,021…0,032 0,023 0,022 0,017
Ат к 5'-НТ 0,027 0,011 0,002 0,023…0,032 0,025 0,022 0,014
Ат к ПНФ 0,032 0,013 0,002 0,027…0,036 0,032 Multiple 0,015
Ат к ГДА 0,023 0,011 0,002 0,019…0,027 0,022 Multiple 0,017
Ат к КО 0,032 0,013 0,002 0,027…0,036 0,032 0,038 0,015




Примечание: М – среднее значение,SD – стандартноеотклонение, m ошибкарепрезентативности, ДИ – доверительныеинтервалы, Ме – медиана, Мо мода, IQR – межквартильныйразмах

Установив среднюю концентрациюантител к изучаемым ферментам в донорских сыворотках,вычислили уровень нормальных показателейоптическойплотности (для Ат к СОД, ГР и КАТ – M ± 2; для Ат к АДА –M ± 3 идля Ат к ЦП,5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО – M ± 5).Таким образом, значенияоптической плотности 0,104 ед. для Ат к СОД, 0,095 ед.для Ат к ГР, 0,105 ед. для Ат к КАТ, 0,092 ед.для Ат к ЦП, 0,068 ед. для Ат к АДА, 0,082 ед.для Ат к 5'-НТ, 0,097 ед. для Ат к ПНФ, 0,078ед. для Ат к ГДА и 0,097 ед. для Ат к КО (в ELISA-тесте сиспользованием ИГАП) были приняты заверхнюю границу нормы (показатели,превышающие эти значения, считалисьположительными по соответствующимантителам).

Таблица 9

Содержание антител к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА иКО
у здоровых людей в зависимости от пола и возраста

Изучаемый показатель (ед.) Стат. показа-тели Группа в целом (n=30) Муж-чины (n=18) Жен-щины (n=12) До 30лет (n=14) От 31до 40 лет (n=8) Свыше40 лет (n=8)

Ат к СОД
M m 0,060
0,022 0,004
0,065 0,017 0,004 0,050 0,024 0,007 0,053 0,015 0,004 0,057 0,017 0,006 0,062 0,014 0,005

Ат к ГР
M m 0,055 0,020 0,004 0,055 0,021 0,005 0,055 0,019 0,007 0,058 0,019 0,005 0,051 0,016 0,006 0,054 0,016 0,006

Ат к КАТ
M m 0,067 0,019 0,004 0,064 0,017 0,004 0,069 0,014 0,004 0,063 0,019 0,005 0,071 0,014 0,005 0,065 0,014 0,005

Ат к ЦП
M m 0,022 0,014 0,003 0,018 0,013 0,003 0,024 0,014 0,004 0,018 0,015 0,004 0,021 0,016 0,006 0,026 0,014 0,005

Ат к АДА
M m 0,026 0,014 0,003 0,028 0,012 0,003 0,023 0,007 0,002 0,026 0,015 0,004 0,023 0,005 0,002 0,029 0,008 0,003

Ат к 5'-НТ
M m 0,027 0,011 0,002 0,024 0,012 0,003 0,032 0,013 0,004 0,023 0,014 0,004 0,031 0,012 0,003 0,029 0,009 0,003

Ат к ПНФ
M m 0,032 0,013 0,002 0,029 0,012 0,003 0,036 0,011 0,003 0,027 0,014 0,004 0,038 0,013 0,005 0,034 0,010 0,004

Ат к ГДА
M m 0,023 0,011 0,002 0,026 0,012 0,003 0,019 0,010 0,003 0,020 0,011 0,003 0,024 0,011 0,004 0,028 0,011 0,004

Ат к КО
M m 0,032 0,013 0,002 0,029 0,012 0,003 0,036 0,017 0,005 0,027 0,014 0,004 0,038 0,006 0,002 0,034 0,013 0,005


Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 || 7 | 8 |   ...   | 17 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.