WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 10 |

Нейропротекторные свойства и механизм действия новых производных аналогов гамма-аминомасляной кислоты

-- [ Страница 4 ] --

Изучение возможных механизмов действия соединений с наиболее выраженными нейропротекторными свойствами с применением следующих методов анализа: нейрофармакологического, электрофизиологического, нейрохимического, биохимического.

Для изучение влияния вещества на параметры мозгового кровотока использовалась модель обратимой билатеральной окклюзии общих сонных артерий в сочетании с управляемой гипотензией.(Мирзоян Р.С., 2001). Регистрацию параметров мозгового кровотока проводили в теменной области головного мозга крыс, наркотизированных этаминалом натрия (50 мг/кг) с помощью ультразвукового допплерографа для исследования кровотока ММ-Д-К производства компании «Минимакс» Санкт-Петербург, Россия. Датчик допплерографа УЗДП-010-01с рабочей частотой 25 МГц, диаметром 0,3 см устанавливали на расстоянии 6-7 см дистальнее основания среднемозговой артерии.

Исследование влияния соединения РГПУ-147 на реологические свойства крови проведено на крови 20 кроликов обоего пола, массой 3,5-4,5 кг. Изучение влияния РГПУ-147 на вязкость крови кроликов с экспериментальным синдромом повышенной вязкости крови выполнено по методу воспроизведения нарушений реологических свойств крови in vitro, путем инкубирования крови при 42,5 градусах в течение 60 минут (Плотников М.Б., 1996). Измерения вязкости крови проводились на анализаторе крови реологическом АКР-2 (Россия). Влияние РГПУ-147 на агрегацию тромбоцитов исследовали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научно-производственной фирмы "Биола" (г. Москва) по методу Born G. (1962) в модификации Габбасова З.А. и соавторов (1989). Величина кислотного гемолиза эритроцитов оценивалась по методу Терского И.А. и Гительзона И.И. (1967). Осмотическую резистентность эритроцитов определяли с использованием спектрофотометра СФ-62 (Россия) при длине волны 540 нанометров.

Изучение противогипоксического действия проводилось на моделях: 1) нормобарическая гипоксия с гиперкапнией («баночная» гипоксия); 2) гемическая гипоксия, вызванная нитритной интоксикацией; 3) гипобарическая гипоксия (Воронина Т.А., Островская Р.У., 2000, 2005).

Влияние соединения РГПУ-147 на состояние окислительного фосфорилирования в митохондриях головного мозга крыс при острой черепно-мозговой травме, моделируемой нанесением уколов иглой в мозговую ткань через трепанационное отверстие, регистрировали полярографически с помощью закрытого электрода Кларка, изготовленного в лаборатории им. А.Н.Белозерского (МГУ) (Висмонт Ф.И., Мороз Ю.К.,1980). Выделение митохондрий из ткани головного мозга крыс производилось методом дифференциального центрифугирования в среде, содержащей 0,25 М сахарозы, 0,01 М трис НС1 и 0,0001 М ЭДТА, рН среды 7,4.

Влияние РГПУ-147 на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивалось по содержанию малонового даильдегида по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой в гомогенате ткани головного мозга крыс, подвергшихся гравитационной ишемии мозга (Прохорова М.И., 1982). Активность антиоксидантных ферментов – супероксиддисмутазы и каталазы измеряли на спектрофотометре SP-ULTRA (OLVEX, Россия) при 406 и 412 нм соответственно (Костюк В.А, Ковалёва Ж.В, Потапович А.И, 1984; Королюк М.А., Л.И Иванова, Майрова И.Г, Токарева В.Е., 1988). Определение содержания лактата крови выполнено энзимным методом, пирувата в крови модифицированным методом Умбрайта (Колб В.Г., Камышников В.С., 1982). При помощи малого биохимического набора определяли содержание, глюкозы, мочевины, креатинина, АлАТ, АсАТ, метгемоглобина в артериальной и венозной крови крыс.

Нейрофармакологический анализ in vivo возможных механизмов действия соединения РГПУ-147 проведен в соответствии с требованиями "Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ" - Фармакологический государственный комитет, МЗ РФ, Москва, 2005".

Нейрохимический анализ влияния вещества РГПУ-147 на содержание моноаминов и их метаболитов определялось методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией (ВЭЖХ/ЭД) на хроматографе LC-304T (BAS, West Lafayette, США) (И.И.Мирошниченко, 1988).

Оценку влияния веществ на транскаллозальный ответ (ТКО) проводили в острых опытах по методике, описанной Молодавкиным Г.М. (1998). ТКО получали путем подачи на раздражающий электрод импульсов напряжения (26-29 В, 0.1 мс) с выхода стимулятора MSE-3R (Nihon Kohden, Япония). Для усиления регистрируемой электрической активности использовали усилители Берг-Фурье анализатора (OTE Biomedica, Италия), настроенные на полосу частот в пределах от 0.2 до 500 Гц. Регистрацию и обработку ТКО осуществляли с помощью электрофизиологического комплекса на основе цифрового осциллографа PCS500 (фирма «Velleman Instruments», Голландия), подключаемого к параллельному порту IBM-совместимого компьютера. Влияние исследуемых веществ на транскаллозальный ответ оценивали по усредненным вызванным потенциалам. Усреднение производили с помощью шаблона, специально разработанного для программы Excel, по 20 реализациям с интервалом между стимулами 5 сек.

Методы статистической обработки.

Статистическая обработка результатов исследования в зависимости от характера данных проводилась с использованием параметрического t-критерия Стьюдента, непараметрического U-критерия Манна-Уитни, критерия 2, метода однофакторного дисперсионного анализа, критерия Стьюдента с поправкой Бонферони для множественных сравнений, а также метода рангового однофакторного анализа Крускала-Уоллиса, критерия Данна для множественных сравнений. Статистически значимыми расценивались эффекты при p<0,05.





Результаты исследования и их обсуждение.

При скрининговом изучении нейропротекторного действия новых производных ГАМК выявлены вещества, обладающие выраженной нейропротекторной активностью и ноотропными свойствами: сукцинатсодержащий аналог карфедона – РГПУ-138, цитратсодержащий аналог фенибута – РГПУ-147, малатсодержащий аналог толибута – РГПУ-159, сукцинатсодержащий аналог фепирона – РГПУ-171, сукцинатсодержащий аналог мефебута - РГПУ-177, цитратсодержащий аналог баклофена - РГПУ-184. Данные соединения уменьшали выраженность осложнений приступа генерализованных клонико-тонических судорог, вызванных максимальным электрошоком (таб.3, рис. 1): статистически значимо уменьшали длительность коматозного состояния, количество летальных исходов и время до восстановления двигательной активности у животных, что можно расценивать как проявление ими нейропротекторных свойств.

Таблица 3.

Влияние производных ГАМК на выраженность судорожного синдрома, вызванного максимальным электрошоком.

Группы Значения показателей (М ± m) (N/n)/%
ДКФ ДТФ ОДС ДКОМЫ КЛИ
Контроль 336,24±30,51 42,27±3,88 385,12±38,54 885,26±76,36 (7/8) 87,5%
РГПУ-138 241,12±23,62* 22,12±1,77** 275,38±26,33* 461,14±49,32** (2/8) 25%**
РГПУ-147 302,12±30,02 18,24±1,06** 331,07±34,15 436,18±20,09** (1/8) 12,5%**
РГПУ-159 293,32±31,38 24,35±2,22* 329,22±28,54 493,12±48,52** (3/8) 37,5%**
РГПУ-171 283,54±27,88 25,38±2,75* 308,28±32,06 637,18±60,53* (4/8) 50%**
РГПУ-177 275,28±29,33 27,48±2,07* 302,11±24,88* 645,32±62,05* (5/8) 62,5%**
РГПУ-184 226,32±21,14* 26,45±2,32* 263,45±27,54* 623,21±59,60* (4/8) 50%**
n=8

Обозначения:

ДКФ – длительность клонической фазы судорог (с.);

ДТФ – длительность тонической фазы судорог (с.);

ОДС – общая длительность судорог (с.);

ДКОМЫ – длительность комы (c.);

КЛИ – количество летальных исходов в группе (N) из общего числа животных в группе (n);

% - процент летальных исходов в группе.

* - p<0,05;** - p<0,01 - – достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных: ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений; критерий 2; непараметрический U-критерий Манна-Уитни.

 Влияние производных ГАМК на скорость восстановления спонтанной-6

Рис. 1. Влияние производных ГАМК на скорость восстановления спонтанной двигательной активности у животных после воздействия максимального электрошока.

Обозначения:

* - p<0,05;** - p<0,01 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных: ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений; непараметрический U-критерий Манна-Уитни.

Перечисленные производные аналогов ГАМК статистически значимо сокращали продолжительность коматозного периода и периода до восстановления двигательной активности животных после МЭШ, а также уменьшали выраженность психоневрологических нарушений у животных, подвергшихся электроконвульсивному шоку: вызывали статистически значимое повышение локомоторной и исследовательской активности в ОП (рис. 2), увеличение латентного периода первого захода в темный отсек и снижение числа животных в группе, зашедших в него в УРПИ (рис. 3), уменьшение времени, затрачиваемого на решение экстраполяционной задачи в ТЭИ (рис. 4).

 Влияние производных ГАМК на поведение животных, подвергшихся-7  Влияние производных ГАМК на поведение животных, подвергшихся-8


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 10 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.