WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |

Противодиабетическая активность гимнемовых кислот

-- [ Страница 2 ] --

Таблица 2

СОДЕРЖАНИЕ КОМПОНЕНТОВ В СОСТАВЕ НЕЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА БАД «ДИАБЕТА»

Название компонента Спецификация Масса, мг
Гимнема-25 GYM-030706 РНИИ «Здоровья» 80
Сухой экстракт Девясила ООО «Биохиммаш» 100
Сухой экстракт корня Солодки GKE 030602 16
Сухой экстракт гребней Винограда R6BSE-030822 40
Пиридоксина гидрохлорид (витамин В6) EAN 4601808000603 1,6
Магния сульфат CAS 7487-88-9 20
Цинка сульфат ГОСТ 4174-69 8
Хрома пиколинат ТУ-9318-001-45370421 0,08
Ванадия сульфат CAS 123334-20-3 0,04
Всего (из расчета на 1 кг массы животного): 265,72

Примечание: биологически активные компоненты, которой включены в состав БАД в дозах, рекомендуемых СанПин РФ 2.3.2.1290-03 2003 г. для потребления в составе продуктов диетического питания (лечебно-профилактического) питания и БАД к пище (Методические рекомендации 2.3.1.1915-04) (В.И. Петров, А.А. Спасов и др., 2007).

Исследования были выполнены на 3410 половозрелый нелинейных белых крысах обоего пола массой 210-330 гр., 20 белых беспородных крысах возрастом свыше 36 мес.; 160 белых беспородных крысах (до 3-х месячного возраста), массой 90 гр.; 100 белых неимбредных мышах обоего пола, массой 50 гр., 79 мышах гибридах F1 (СВАґC57BL/6), массой 15-20 г.; 12 кроликах породы «Шиншилла» массой 4-4,5 кг; 15 собаках массой 8-12 кг и 60 морских свинках альбиносах, массой 250-300 гр, которые содержались в условиях вивария ВолГМУ с естественным световым режимом, на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТР 50258-92), с соблюдением рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, а также правил проведения доклинических исследований в РФ (ГОСТ З51000.3-96 и 51000.4-96). Эксперименты были одобрены комитетом по этической экспертизе доклинических исследованийВолГМУ (протокол № 1-2006 от 10.02.06).

В работе использовали: полный адъювант Фрейнда (Grand Island Biological Compani, USA), стрептозотоцин (Sigma, USA), аллоксан (Merck, США), глюкозу (ЧДА, Реахим, Россия), олеиновую кислоту (Chemapol, Чехия), натрия таурохолат (Chemapol, Чехия), раствор Рингера (Хемофарм, Югославия), тиобарбитуровую кислоту (ТБК) (ICN Biomedicals, США), фосфорную кислоту (Реахим, Россия), люминол (Serva, Германия), сульфат железа (ЧДА, Украина), аскорбиновую кислоту (Chemapol, Чехия), 2,2-дифенил-l-пикрилгидразил (ДФПГ) (Sigma, США), стрептозотоцин (Sigma, США), цитрат натрия (ЧДА, Реахим, Россия), фильтры SMWPO 5 мкм (Millipore, Франция), динатриевую соль аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) («Ренам», Венгрия), адреналин гидрохлорид (“Sigma”, США), коллаген (“Sigma”, США). В качестве препаратов сравнения использовали диабетон («Сервье», Франция), танакан (Beaufour Int., Франция), Pro- («PharmaTerra», США), инсулин «Актрапид НМ» («Ново-Нордиск», Дания); мальтоза (ЗАО «Вектон, Россия), акарбоза («Bayer AG», Германия),

Уровень глюкозы в крови определяли глюкозооксидазным методом («Глюкоза ФКД», Россия); гликозилированный гемоглобин методом катионно-обменной хроматографии низкого давления («Фосфосорб», Россия); концентрацию инсулина в плазме крови иммуноферментативным способом (DRG, Австрия).

Изучение эффективности Композиции на толерантность к сахарной нагрузке проводили на моделях перорального (глюкоза в дозе 3 г/кг) (З.И. Цюхно и соавт., 1981; В.Г. Баранов, 1983) и внутривенного (глюкоза в дозе 1 г/кг) глюкозотолерантных тестах (Masiello et al. 1998; Т.П. Бондарь, Г.И. Козинец, 2003) с оценкой результатов по А.В. Древаль (2005).

Гиперинсулинемию моделировали двукратным ежедневным подкожным введением инсулина «Актрапид МС» по О.Е. Гордиенко, (1973). Для оценки состояния углеводного обмена использовали пероральный глюкозотолерантный тест, пробу Химсворда (З.И. Цюхно и соавт., 1981). Латентную форму стрептозотоцинового диабета моделировали преддиабетогенными дозами стрептозотоцина - 35 мг/кг, в/брюшинно (Ю.М. Колесник, 1992; J. Duhault et al., 1998). Ожирение моделировали с использованием диеты (содержание жиров и углеводов более 80% от общей калорийности рациона) в течение месяца по И.А. Волчегорскому (2000).





Экспериментальные формы сахарного диабета (СД) моделировали: аллоксан-индуцированный СД - аллоксаном, 120 мг/кг, в/брюшинно (K. Srinivasan, P. Ramarao, 2007); стрептозотоцин-индуцированный СД - стрептозотоцином 45 мг/кг, в/в (K. Srinivasan, P. Ramarao, 2007); иммуннозависимый СД - полным адъювантом Фрейнда 0,2 мл однократно, п/к, и стрептозотоцином 25 мг/кг, в/в, ежедневно в течение 5 дней (B. Ziegler et al., 1990). Изучение влияния препаратов, на эффекты экзогенно введенного инсулина у панкреатэктомированных собак проводили по схеме B.A. Houssay (1960).

Морфологическое исследование1 поджелудочной железы крыс проводили по общепринятым гистологическим методикам с оценкой размеров ядер -клеток и площади, занимаемой - -клетками, размеров и объемной доли островка Лангенгарса (ОЛ) по отношению к экзокринной части органа. Пролиферативную активность -клеток ОЛ оценивали по количеству митозов с помощью моноклональных антител к ядерному антигену пролиферирующих клеток (PCNA, Lab Vision, США) и Ki-67 (Lab Vision, США). Для выявления процессов апоптоза использовали поликлональные антитела к Bax (BD Biosciences Pharmingen) и к каспазе-3 (Lab Vision, США); и моноклональные антитела к P53 (Lab Vision, США) и к Bcl-2 (Santa Cruz Biotechnology, США). Визуализировали непрямым иммунопероксидазным методом с высокотемпературной и ферментной демаскировкой антигенов. Анализ морфологических показателей проводили с использованием фотокамеры«Canon», Japan, 5.0 мегапикселей на базе микроскопа «Axiostar plus», Германия (объектив х40, х100 и окуляр х10), при этом оценивали количество иммунопозитивных клеток к общему количеству клеток ОЛ.

Действие препаратов на всасывание мальтозы в кишечнике оценивали по H. Luo (2001). Изучение влияния препаратов на всасывание глюкозы и олеиновой кислоты в кишечнике проводили по F. Wang et al. (1998) при постоянной перфузии тонкого кишечника крыс, определяя концентрацию олеиновой кислоты по G. Duncombe (1962).

Степень утилизации глюкозы поперечно-полосатой мышечной тканью крыс оценивали по Г.П. Дудченко (2001). Влияние изучаемых веществ на массу тела фиксировали на фоне 4-х недельного принудительного плавания животных с алиментарным ожирением по И.А. Волчегорскому (2000).

Влияние изучаемых веществ на реологические свойства крови определяли по следующим показателям: вязкость крови (Н.А. Добровольский, 1989), индекс агрегации эритроцитов (L. Dintenfass, 1989), индекс эффективности доставки кислорода (В.В. Якусевич, 1998), скорость фильтрации эритроцитарной взвеси, кислотную (И.А. Терской, 1967) и осмотическую резистентность эритроцитов (T. Osaka, 2001), заряд и вязкость мембраны эритроцитов с использованием зондов ДСМ+ и ДСП-6 (В.Г. Добрецов, 1989).

Изучение влияния веществ на агрегацию тромбоцитов проводили по методу G. Born (1962), З.А. Габбасов (1989) с использованием индуктора агрегации АДФ («Reanal», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкM. Хронометрически на гемокоагулометре «SOLAR» определяли ПРВ, ТВ, ФГ, АПТВ с использованием стандартных наборов и классических методик (З.С. Баркаган, 1999).

Антиоксидантные свойства веществ изучали с помощью моделей: аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов (ПОЛ) (В.З. Ланкин и соавт., 1975), взаимодействия со стабильным свободным радикалом ДФПГ ( G. Glavind, 1963) и хемилюминесценции (ХЛ) в системе железо (II) индуцированого окисления люминола с генерацией активных форм кислорода (АФК) (С.Г. Семешко, Р.Р. Фархутдинова, 2002).

Концентрации ХСобщ и ТГ определяли в сыворотке крови, а ХС ЛПВП в супернатанте после преципитации ЛП, содержащих ЛПОНП и ЛПНП, с использованием ферментативного колориметрического теста GPO-PAP («Biocon», Германия), и вычисляли значение концентрации ХС ЛПНП (W.T.Friedewald,1972) и индекс атерогенности (ИА) (А.Н. Климов, 1977). Эксперименты по изучению острой и хронической токсичности2, а также специфических видов токсичности3: эмбрио- гонадотоксичности; иммунотоксичности, аллергенности, мутагенности проводились в соответствии с методическими рекомендациями проведения доклинических (токсикологических) исследований (Р.У. Хабриев и соавт., 2005) и правилами лабораторной практики в РФ (приказ № 267 от 19.07.2003 г).

Статистическую обработку данных проводили параметрическими и непараметрическими методами анализа (С. Гланц, 1998) с использованием пакета прикладных пакета программ Statistica 6.0 (StatSoft, США).

Результаты исследования и их обсуждение.

 Влияние Гимнемы-25, Гимнемы-50, Гимнемы-75 при пероральном введении в-0 Рис.1. Влияние Гимнемы-25, Гимнемы-50, Гимнемы-75 при пероральном введении в дозе 280 мг/кг и диабетона (10 мг/кг) на уровень глюкозы в крови интактных крыс (М ± m). Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. * - данные достоверны по отношению к контролю, парный критерий Стьюдента, (р0,05)

Согласно результатам проведенных исследований, экстракт Гимнемы лесной (ГЛ) оказывает сахароснижающий эффект в организме интактных животных. При этом различные фракции данного экстракта проявляют неодинаковое гипогликемическое действие. При изучении уровня гипогликемической активности экстрактов ГЛ в трех концентрациях Гимнема-25, Гимнема-50, Гимнема-75, отличающихся друг от друга содержанием ГК и гимнемосапонинов было выявлено, что сахароснижающее действие Гимнемы-25 превосходит остальные фракции изучаемого экстракта (рис. 1), уступая по величине активности диабетону. Так было выявлено, что Гимнема-25 через 30 минут после введения снижает уровень глюкозы на 21,6% по сравнению с исходными показателями, а ко второму часу наблюдений уровень гликемии уменьшается на 23,9%, р0,05. Кроме того Гимнема-25 снижает площадь под кривой «концентрация глюкоза-время» на 26,7% (р<0,05) по отношению к контрольной группе животных при проведении глюкозотолерантных тестов.

При изучении зависимости «доза-эффект» (рис. 2) у Гимнемы-25 регистрируется усиление гипогликемического эффекта в диапазоне от 70 мг/кг до 280 мг/кг. В ходе исследования для Гимнемы-25 была установлена средняя эффективная доза (280мг/кг), при применении которой наблюдается снижение глюкозы в крови на 1/3 от исходных показателей. Таким образом, величина гипогликемического эффекта в значительной мере зависит от степени очистки экстракта, снижаясь в ряду:

Гимнема-25>Гимнема-50Гимнема-75.

При исследовании антидиабетического действия экстрактов у животным с экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным СД наблюдалось снижение содержания глюкозы в плазме крови во всех экспериментальных группах (табл. 3). При этом эффективность Гимнемы-25 оказалась достоверно выше таковой у Гимнемы-50 и Гимнемы-75 в 1,5 раза и в 3,4 раза, соответственно. В свою очередь величина гипогликемического эффекта Гимнемы-75 составила половину от величины Гимнемы-50 (p0,05).

Таблица 3

влияние гимнемы-25, гимнемы-50, гимнемы-75 (280 мг/кг) и диабетона (8 мг/кг) при однократном пероральном введении на уровень глюкозы в крови крыс с

экспериментальным стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом.

Препарат Изменения гликемии, %
Гимнема-25 -45,27±5,40*
Гимнема-50 -26,18±7,29*
Гимнема-75 -13,52±4,47
диабетон -52,59±9,88*

Обозначения: - данные достоверны по отношению к исходным значениям данной группы, (р<0,05), t-критерий Стьюдента. * - данные достоверны по отношению к контрольной группе крыс с экспериментальным сахарным диабетом, (р<0,05) Newman-Keuls test.

Примечание: изменения приведены в процентах относительно исходных данных через 2 часа после введения веществ.

Показатели утилизации глюкозы при применении Гимнемы-50 и Гимнемы-75 уступали показателям активности Гимнемы-25 в ходе проведения перорального глюкозотолерантного теста. Так через 30 мин после внутрижелудочного введения Гимнемы-25 регистрировалось уменьшение уровня гликемии на 11,9% по сравнению с контролем-диабет, а спустя час после введения глюкозы ее уровень в крови понизился в 2,5 раза по сравнению с контрольными значениями. При исследовании образцов крови второго часа было выявлено, что уровень глюкозы в крови крыс, получавших Гимнему-25, составил 4,6±0,11 ммоль/л, что существенно ниже значений полученных для группы контроль-диабет. Подобные результаты были получены и в двух других экспериментальных группах (Гимнема-50 и Гимнема-75). При этом гипогликемическая активность Гимнемы-50 превалировала над таковой Гимнемы-75, и ко второму часу наблюдения содержание глюкозы понизилось на 20,7% и на 6,2% соответственно по сравнению с группой контроль-диабет (р0,05). Кроме того, было зарегистрировано сокращение площади под кривой концентрация «глюкоза-время» на 32,4% в группе крыс получавших Гимнему-50, и на 13,3% у животных с Гимнемой-75 по сравнению с контролем. Таким образом, показатели утилизации глюкозы при применении Гимнемы-50 и Гимнемы-75 значительно уступали показателям активности Гимнемы-25.

При проведении внутривенного глюкозотолерантного теста было установлено, что Гимнема-25 по выраженности действия на элиминацию глюкозы из периферического кровотока, превосходит Гимнему-50 и Гимнему-75. Гимнема-25 увеличивала площадь под кривой «глюкоза-время» в 2 раза по сравнению с контролем, что больше аналогичного показателя, выявленного после применения Гимнемы-50 и достоверно превышает этот же показатель в группе, получавшей Гимнему-75. Таким образом, установлено, что после применения экстрактов ГЛ происходит умеренное сдерживание показателей гликемии. Однако по величине гипогликемической активности Гимнема-50 и Гимнема-75 уступают эффективности Гимнемы-25.

Рис. 3. Влияние Гимнемы-25 (280 мг/кг) на содержание инсулина в крови крыс с сахарным диабетом (М ± m). Примечание. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. * - данные достоверны по отношению к интактной группе крыс, - данные достоверны по отношению к группе крыс с сахарным диабетом, ANOVA, Newman-Keuls test (р<0,05).


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.