WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 7 |

Конденсированные производные бензимидазола – новый класс антитромбогенных средств

-- [ Страница 4 ] --

Данные статистически значимы по отношению к значениям, полученным в контроле * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р< 0,001 – критерий Манна-Уитни.

На фоне действия изученных веществ РУ-254, РУ-185, РУ-891 уменьшалась смертность белых мышей при системном коллаген-адреналиновом тромбозе, вызванном совместным введением тромботических агентов в хвостовую вену животных (табл.4). Наибольшую антитромботическую активность при данном виде экспериментального тромбоза проявили соединения РУ-891 и РУ-185. Выживаемость животных при их введении составила по 90% соответственно, что в 3 раза превышает эффект препарата сравнения АСК. Антитромботическая активность соединения РУ-254 была менее выраженной, однако превосходила известный антиагрегант в 2,3 раза.

Таблица 4. Влияние cоединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 в дозах, изоэквимоляльных дозе ацетилсалициловой кислоты, на выживаемость белых беспородных мышей на модели коллаген (0,5 мг/кг) - адреналинового (0,06 мг/кг) тромбоза, (М±m).

N п/п Название вещества Число тестируемых Животных Число погибших животных Выжившие животные, %
1. Контроль 20 19 5
2. РУ-891 10 1 90**#
3. РУ-254 10 3 70**
4. РУ-185 10 1 90**#
5. АСК 10 7 30

*-(р0,05); ** - (р0,01) данные статистически значимы по отношению к контролю, точный критерий Фишера

#-(p<0,05)- данные статистически значимы по отношению к группе мышей, получавших ацетилсалициловую кислоту, точный критерий Фишера.

Наличие данного вида активности у изученных соединений, подтверждается проведенными гистологическими исследованиями органов животных (табл.5). В образцах легких контрольных животных при микроскопическом исследовании в

Таблица 5. Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 на изменение некоторых морфометрических параметров тромбов в сосудах легких мышей. (М±m, n=5)

N п/п Название вещества Относительная площадь тромбов, % Средняя площадь тромба на срезе, мкм2
1. Контроль (физ. р-р) 3, 538 ± 1,982 1423,5 ± 0,328
2. РУ-891 1,047 ± 0,290 * 399,8 ± 185,2 **
3. РУ-254 0,838 ± 0,688 ** 1257 ± 881,5
4. РУ-185 0,670 ± 0,334 ** 554,4 ± 388,5 **
5. АСК 1,327 ± 0,152 * 1337,7 ± 888,5

*- (р0,01); ** - (р0,001) данные статистически значимы по отношению к контролю, критерий Манна-Уитни; n -число тестируемых животных

значительной части сосудов микроциркуляторного русла были обнаружены белые тромбы, адгезированные к сосудистой стенке и находящиеся в просвете сосуда.

Таким образом, высокая антитромботическая активность производных бензимидазола на различных моделях артериальных тромбозов, позволяет предположить, что в основе этого вида активности лежит угнетение процессов агрегации тромбоцитов, так как именно тромбоциты играют ключевую роль в инициации данных видов тромбозов.

При изучении влияния соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на время кровотечения из хвостовой вены мышей, наблюдалось удлинение данного показателя. Однако по сравнению с АСК, время кровотечения под влиянием





соединений изменялось не сильно относительно контроля, что позволяет предположить в будущем отсутствие или наличие слабовыраженных побочных эффектов в виде кровотечений (рис. 4).

Рис 4. Влияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и АСК на время кровотечения у-5Рис 4. Влияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и АСК на время кровотечения у мышей.

* - данные статистически значимы по отношению к значениям, полученным в контроле, критерий Манна-Уитни (р<0,05);

#- данные статистически значимы по отношению к значениям, полученным при изучении АСК, критерий Манна-Уитни (р<0,05)

Влияние на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз при экспериментальном диабете. Исходя из того, что важным составляющим микроангиопатии при сахарном диабете (СД) является дисфункция тромбоцитов [Ambrosi, 2006; Lopes, 2011] было изучено влияние производных бензимидазола на тромбоцитарно-сосудистый гемостаз при экспериментальной аллоксановой интоксикации [Chougale, 2007].

В связи с тем, что при СД проводится длительная гипогликемическая терапия, оценку эффективности действия веществ и препарата сравнения на гемостаз проводили после семидневного внутрижелудочного введения животным с тяжелой формой аллоксановой интоксикации. Исследуемые вещества РУ-891 и РУ-185 после курсового введения практически не оказывали влияния на уровень глюкозы в крови. Соединение РУ-254 и гликлазид достоверно снижали количество глюкозы в крови на 29 и 27 % соответственно. В эксперименте при аллоксановой интоксикации наблюдалось статистически значимое повышение агрегации тромбоцитов по сравнению с интактными животными. Уменьшение данного показателя под влиянием cоединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и гликлазида у диабетных крыс было статистически значимым. При этом соединения РУ-891 и РУ-254 превосходили по своей активности препарат сравнения, а соединение РУ-185 незначительно уступало ему (рис.5).

 Действие соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и гликлазида при курсовом-6

Рис.5. Действие соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и гликлазида при курсовом пероральном введении на агрегацию тромбоцитов крыс с экспериментальным диабетом ex vivo в дозах равных ED50, полученных на модели внутрисосудистой агрегации тромбоцитов.

*- р<0,05 – данные статистически значимы относительно агрегации крыс с экспериментальным диабетом, критерий Манна-Уитни.

# - р<0,05- статистическая значимость относительно интактных животных, критерий Манна-Уитни.

В области сосудистого дефекта нарушается геометрия потока крови с явлениями турбулентности, которые являются одним из основных гидродинамических факторов сосудистого тромбоза [Плотников, 2005]. Эти процессы могут усиливаться на фоне синдрома повышенной вязкости, который наблюдается при СД. Оценивая, влияние исследуемых веществ на ВК у крыс с аллоксановым диабетом, было выявлено статистически значимое снижение этого показателя у всех препаратов при различных скоростях сдвига, превосходящее препарат сравнения пентоксифиллин. Следует отметить, что наибольшее действие изучаемые вещества оказывали при низкосдвиговых значениях ВК. Наибольшую активность в данном случае проявило соединение РУ-891. Активность исследуемых веществ в отношении влияния на ВК при высоких скоростях сдвига оказалась ниже у всей группы препаратов.

Индекс агрегации эритроцитов больных животных составил 2,31 (рис.6), что на 33% больше данного показателя у интактных животных. Изученные соединения уменьшали значения индекса агрегации эритроцитов. Так, вещество РУ-891 снижало данный показатель на 31,6% а соединения РУ-254 и РУ-185 на 28,5% и 26,4% соответственно. Препарат сравнения пентоксифиллин уменьшал индекс агрегации эритроцитов больных животных на 10,4%.

 Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и пентоксифиллина на индекс-7

Рис.6. Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и пентоксифиллина на индекс агрегации эритроцитов крыс с экспериментальным аллоксановым диабетом.

*-р<0,05 – данные статистически значимы относительно индекса агрегации эритроцитов крыс с экспериментальным диабетом

Нарушения гемостаза при СД обусловливают ускоренное прогрессирование атеросклероза, что сопровождается риском возникновения тромбозов [Arikawa, 2006]. Поэтому, нами была изучена антитромботическая активность соединений на модели артериального тромбоза, вызванного повреждением стенки артерий электрическим током при экспериментальном СД. В результате данного исследования установлена высокая антитромботическая активность производных бензимидазола (рис.7). Наибольшую способность пролонгировать время образования тромба проявили гипогликемическое соединение РУ-254 и гликлазид, что связано со способностью данных соединений не только устранять глюкозотоксичность, но и оказывать ингибирующее влияние на процессы агрегации тромбоцитов.

 лияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и гликлазида при курсовом-8

Рис.7 Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и гликлазида при курсовом введении на время наступления полной окклюзии сонной артерии крыс с аллоксановой интоксикацией на модели экспериментального тромбоза, индуцированного электрическим током.

*- р<0,05 – данные статистически значимы относительно времени наступления окклюзии сонной артерии у группы контрольных крыс с экспериментальным диабетом.

Таким образом, установленная способность производных бензимидазола улучшать состояние тромбогенного потенциала крови при СД имеет значение для создания на их основе новых лекарственных средств, для лечения и предупреждения развития осложнений при СД II типа.

Изучение механизма действия. Важным аспектом создания лекарственных препаратов является изучение их механизма действия, так как в будущем это предполагает наличие у них побочных эффектов и токсического действия.

Анализ предполагаемых механизмов действия с помощью методов in silico. В системе PASS для соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 были получены значения прогнозных показателей 79 видов биологической активности, релевантных антиагрегантной. С учетом полученных значений можно предположить, что механизм антиагрегантной активности соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 может реализовываться через ингибирование цГМФ- и цАМФ-зависимой фосфодиэстеразы. Вместе с тем, для соединений РУ-891 и РУ-254 прогнозируется маловыраженная активность в отношении ингибирования кальмодулина и кальций-кальмодулин-зависимой протеинкиназы.

Прогноз уровня фармакологической активности соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 в ИТ «Микрокосм» также показал наличие или отсутствие некоторых возможных механизмов антиагрегантного действия изученных соединений.

По результатам данного вида прогноза, вещество РУ-891, вероятно, будет проявлять высокую антиагрегантную и кальций-блокирующую активности, так как имеет три положительных оценки по консервативной, нормальной и рисковой стратегиям прогноза в отношении данных видов действия. Механизм антиагрегантной активности вещества РУ-254, согласно результатам прогноза в ИТ «Микрокосм», возможно, не должен быть связан с кальций-блокирующим и антикальмодулиновым действием. Соединение РУ-185 предположительно должно проявлять высокую активность в отношении ингибирования кальмодулина, а также умеренную антиагрегантное и кальций-блокирующее действие. Согласно ранее проведенным исследованиям по изучению соединений РУ-254 и РУ-185 на активность ФДЭ цАМФ [Cибирякова, 1995] было показано, что вещество РУ-254 не оказывает ингибирующего действия ни на базовую активность ФДЭ, ни на активность ФДЭ цАМФ, зависимую от белка-кальмодулина. Соединение РУ-185 проявляет выраженную блокирующую активность в отношении кальмодулин-зависимой ФДЭ цАМФ, не оказывая влияние на ее базовую активность.

Экспериментальное изучение механизма действия производных бензимидазола. Сложность проблемы избирательной фармакологической регуляции активности тромбоцитов заключается в том, что на их мембране экспрессированы рецепторы к различным агонистам агрегации. На начальном этапе изучения механизма действия производных бензимидазола было исследовано, не являются ли данные соединения конкурентными антагонистами индукторов агрегации тромбоцитов.

Величины антиагрегантной активности изученных соединений в отношении индукторов агрегации тромбоцитов, вызванной АДФ, адреналином, коллагеном, арахидоновой кислотой, U46619, тромбином и А23187, выраженные в EC50 представлены в таблице 6.

Таблица 6. Влияние соединений РУ-254, РУ-185 и РУ-891 на агрегацию тромбоцитов кролика, вызванную различными индукторами.

N п/п

Индукторы агрегации тромбоцитов

Концентрация индуктора

EC50,М

РУ-891

РУ-254

РУ-185

1.

АДФ

5 мкМ

1,3 x 10-4

2,6 x 10-4

3,3 x 10-4

2.

Адреналин

5 мкМ

7,9 x 10-6

2,5 x 10-4

6,0 x 10-5

3.

Арахидоновая к-та

50мкМ

7,9x 10-5

8,4 x 10-5

7,2 x 10-5

4.

Коллаген

20 мкг/мл

1,4x 10-5

1,8 x 10-4

7,3x10-5

5.

Тромбин

0,5 ед/мл

6,8 x 10-5

1,6 х 10-3

1,0 х 10-4



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 7 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.