WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |

Конденсированные производные бензимидазола – новый класс антитромбогенных средств

-- [ Страница 5 ] --

6.

U46619

3 мкМ

9,6 x 10-5

1,2 x 10-3

8,3 x 10-5

7.

А23187

3 мкМ

1,2 х 10-6

4,8 х 10-5

1,1 х 10-4

Соединение РУ-891 выраженно блокировало агрегацию тромбоцитов, вызванную всеми изученными индукторами, однако наибольшую активность вещество проявило в отношении активации тромбоцитов, вызванной адреналином и кальциевым ионофором (А23187), что, с учетом механизма возникновения данных активаций, может указывать на способность соединения РУ-891 снижать уровень кальция в тромбоцитах. Гипогликемическое соединение РУ-254 также блокировало агрегацию тромбоцитов, вызванную различными индукторами, проявив наибольшую ингибирующую способность в отношении активации красных кровяных пластинок, вызванной арахидоновой кислотой и кальциевым ионофором. Низкая активность данного вещества в отношении агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином дает возможность предположить, что механизм его антиагрегантного действия вероятно не будет реализовываться через снижение активации фосфолипазы С и угнетения образования инозитол-1,4,5-трифосфата. Антиоксидантное вещество РУ-185 проявило ингибирующую активность в отношении всех изученных индукторов. Блокирование агрегации тромбоцитов, вызванной агонистом тромбоксаноых рецепторов U 46619, соединениями РУ-891 и РУ-185 может указывать на снижение уровня ТХА2. Относительно высокие концентрации веществ, необходимые для проявления их антиагрегантого эффекта в отношении изученных индукторов агрегации тромбоцитов, подтверждают, что первичным местом воздействия данных соединений не являются мембранные рецепторные системы данных агонистов.

Ключевую роль в агрегации тромбоцитов играет Р2Y12 рецептор тромбоцитов [Nawarskas,2011]. При изучении влияния соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 в концентрации 1 мкМ на данный подтип рецепторов методом малоуглового рассеяния, соединение РУ-891 ингибировало агрегацию тромбоцитов, вызванную активацией P2Y12 рецепторов на 98%, тогда как вещество-стандарт PPADS на 21,1%. Эффект соединений РУ-254 и РУ-185 оказался статистически незначимым относительно вещества сравнения. Выраженная способность соединения РУ-891 блокировать процесс агрегации тромбоцитов, вызванной активацией P2Y12 рецепторов, предполагает возможное его влияние на активацию аденилатциклазного пути (рис. 8).

 Влияние изученных соединений в концентрации 1 мкМ на степень агрегации-9

Рис.8. Влияние изученных соединений в концентрации 1 мкМ на степень агрегации тромбоцитов кролика в кальциевой среде, индуцированной 200 нМ АДФ.

р0,001-данные статистически значимы по отношению к веществу сравнения, критерий Манна-Уитни.

Перспективным направлением в изучении механизма действия соединений с антиагрегантной активностью является воздействие на баланс между продуктами метаболизма арахидоновой кислоты – простациклином (ПГI2) и ТХА2. В результате проведенных исследований было показано, что стенка аорты крыс образует и высвобождает в инкубируемую среду сильный антиагрегационный фактор по действию, подобный простациклину. Внутривенное введение адреналина снижает антиагрегационную активность стенки аорты, что ведет к повышению тромбогенного потенциала крови и увеличивает риск возникновения тромбоза. Хорошо известно, что ацетилсалициловая кислота уменьшает синтез эндотелием простациклина [Лупанов, 2009]. В отличие от нее, производные бензимидазола не оказывают влияния на образование простациклино-подобной субстанции стенкой аорты у интактных животных и восстанавливают ее антиагрегационную функцию, сниженную адреналином (рис.9).

ТХА2 является мощным проагрегантом и вазоконстриктором. Доказательством повышения синтеза ТХА2 в тромбоцитах является обнаружение в них значительного количества малонового диальдегида (МДА) (Smith,1976). В результате данной серии исследований было показано, что соединения РУ-891, РУ-254 и РУ-185 при внутрижелудочном введении крысам достоверно снижали уровень МДА в тромбоцитах, стимулированных тромбином, превосходя по своей активности ацетилсалициловую кислоту (рис.10).

 лияние соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на антиагрегационную-10

Рис. 9 Влияние соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на антиагрегационную активность сосудистой стенки, сниженную адреналином (M±m)

*- p<0,05 - данные статистически значимы по отношению к результатам, полученным в контроле; - p<0,05 данные статистически значимы по отношению к показателю агрегации тромбоцитов крыс индуцированных адреналином, критерий Манна-Уитни.

Биохимические процессы, происходящие при активации, а в дальнейшем при агрегации красных кровяных пластинок, вызванные различными химическими и биологическими стимуляторами, отличаются по механизмам действия.

 лияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и ацетилсалициловой кислоты-11





Рис.10 Влияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 и ацетилсалициловой кислоты (АСК) на изменение уровня малонового диальдегида (МДА) в тромбоцитах крыс в процессе агрегации, индуцированной тромбином.

Примечание: исход – содержание МДА в интактных тромбоцитах; тромбин - уровень МДА после стимуляции тромбоцитов тромбином

* -p<0,01 -данные статистически значимы относительно исхода (контроль)

**-p<0,01 -данные статистически значимы относительно, агрегации тромбоцитов, индуцированной тромбином, критерий Манна-Уитни.

Однако действие всех этих стимуляторов сводится к одному: повышению уровня кальция в цитоплазме тромбоцитов [Colomer, 2010]. Поэтому можно полагать о том, что ионам Са2+ принадлежит ключевая роль в регуляции функциональной активности тромбоцитов, при этом особо важное значение имеют внутриклеточные ресурсы Са2+ [Harper, 2009]. C целью уточнения некоторых механизмов антиагрегантного действия производных бензимидазола, было исследовано их влияние на уровень внутриклеточного и мембраносвязанного Са2+ с использования флуоресцентных зондов. Для того, чтобы определить, является ли действительно действие изученных соединений на прирост цитоплазматической концентрации Са2+, индуцированный тромбином, результатом ингибирования входа и мобилизации Са2+ из внутриклеточных депо, эксперименты с использованием флуоресцентных зондов были выполнены в два этапа как в присутствии, так и в отсутствие физиологических концентраций Са2+. Прирост флуоресценции Fura-2/АМ, индуцированный тромбином, в присутствии внеклеточного Са2+ отражает суммарный прирост внутриклеточного Са2+ ­за счет входа в клетку и мобилизации из внутренних источников. В то же время увеличение флуоресценции Fura-2/АМ, индуцированное тромбином в отсутствие внеклеточного Са2+, отражает высвобождение Са2+ из внутриклеточных депо.

Производные бензимидазола и верапамил статистически значимо снижали концентрацию внутриклеточного кальция в тромбоцитах в присутствии его физиологических концентраций. Наибольшую активность проявило соединение РУ-891 (рис.11).

 лияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и препаратов сравнения в-12

Рис.11 Влияние соединений РУ-891, РУ-254, РУ-185 и препаратов сравнения в дозе 100 мкМ на прирост уровня внутриклеточного кальция индуцированный тромбином.

*-p<0,05-данные статистически значимы относительно контроля, критерий Манна-Уитни

Препарат сравнения АСК оказалась не эффективной, так как снижала прирост внутриклеточного кальция всего на 1,7 % по сравнению с контролем. Полученные данные, свидетельствуют о способности производных бензимидазола и верапамила снижать суммарный прирост ионов Са2+ за счет его­ входа в клетку и мобилизации из внутренних источников. ED50 соединений при этом составила для РУ-891 – 3,6 мкМ, для РУ-254 – 34 мкМ и для РУ-185 – 100 мкМ (рис.12).

На втором этапе было изучено влияние соединений на уровень внутриклеточного кальция, высвобождаемого из внутриклеточных депо (эксперименты в бескальциевой среде). Антагонист ионов кальция верапамил, соединения РУ-254 и РУ-185 в данном исследовании показали свою неэффективность. Напротив, соединение РУ-891 проявило высокую активность на предмет ингибирования кальция, высвобождаемого из внутриклеточных депо тромбоцитов. ED50 вещества РУ-891 при этом составила 5,1 мкМ (рис.13).

Таким образом, проведенные исследования по влиянию производных бензимидазола на уровень внутриклеточного кальция в тромбоцитах, позволяют полагать, что соединение РУ-891 обладает выраженной ингибирующей активностью в отношении данного показателя.

 лияние соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на прирост уровня-13

Рис.12 Влияние соединений РУ-891, РУ-254 и РУ-185 на прирост уровня внутриклеточного кальция в тромбоцитах, индуцированного тромбином ( % ингибирования) в кальциевой среде.

 лияние соединения РУ-891 на уровень внутриклеточного кальция в-14

Рис.13 Влияние соединения РУ-891 на уровень внутриклеточного

кальция в тромбоцитах, индуцированный тромбином (без кальциевая среда)

* -p<0,01 * * -p<0,001-данные статистически значимы относительно контроля, критерий Манна-Уитни.

Повышение содержания ионизированного кальция в плазме крови вызывает увеличение доли мембраносвязанного кальция. Он способен связываться с мембранными анионами (главным образом с карбоксильными группами белков и кислыми фосфолипидами )[ Xander, 2005]. Мембраносвязанный кальций участвует в агрегатообразовании тромбоцитов, а также способен значительно изменять не только поверхностный заряд, но и свойства и структуру клеточной мембраны. Также повышается вероятность входа ионов в клетку [Stefanini, 2010]. При изучении влияния производных бензимидазола на уровень мембраносвязанного кальция в тромбоцитах было показано, что из трех изученных соединений, только вещество РУ-185 статистически значимо в дозе 100 мкМ ингибирует данный данный показатель (табл.7).

Таблица 7. Влияние соединений РУ-254, РУ-185, РУ-891 на уровень мембраносвязанного кальция в тромбоцитах (опыты in vitro) (М±m).

№ п/п Название соединения Доза, мкМ % ингибирования уровня кальция
1. РУ-891 100 4,13±2,9
2. РУ-254 100 11,8±3,69
3. РУ-185 100 40,1±1,2*


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.