WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 ||

Направленный поиск новых блокаторов 5-ht3-рецепторов среди производных индола и бензимидазола и изучение их фармакологических свойств

-- [ Страница 5 ] --


Примечания: * – достоверно по отношению к интактному контролю (p0,05, критерий Краскела-Уоллиса с постобработкой критерием Данна), ** – достоверно по отношению к адъювантной гипералгезии (p0,05, критерий Краскела-Уоллиса с постобработкой критерием Данна)

С этими данными согласуются результаты формалинового теста, в котором изучаемое вещество проявило активность во второй фазе эксперимента, отражающей влияние на болевую чувствительность в ходе развивающегося воспалительного процесса в периферических тканях, снижая выраженность вызванной формалином реакции на 77% в дозе 1,5 мг/кг и на 46% в дозе 7,5 мг/кг (табл. 8). При этом в первой фазе, отражающей активацию чувствительных С/А-волокон и возникновение первичного потока болевой импульсации в ответ на химическое раздражение, эффекта РУ-1276 не наблюдалось, равно как и на модели механического раздражения, приложенного через 2 минуты после введения формалина.

Так, наличие у вещества РУ-1276 анальгетической активности на модели адъювантного артрита и во второй фазе формалинового теста в совокупности с отсутствием влияния на проведение болевых импульсов в структурах ЦНС, позволяет сделать вывод о том, что механизм анальгетического действия изучаемого соединения является периферическим и в основе его лежит блокирование 5-HT3-рецепторов и последующее устранение эффектов серотонина как медиатора ноцицептивной реакции, особенно в условиях воспаления.

Таблица 8

Влияние соединения РУ-1276, ондансетрона и диклофенака натрия при в/брюшинном введении на выраженность формалиновой гипералгезии (M±m)

Вещество/ группа Доза, мг/кг Число вздрагиваний лапы
в 1 фазу во 2 фазу
Интактный контроль 0 0
Формалиновая гипералгезия 31,2±4,4* 175,2±16,0*
РУ-1276 0,15 27,3±2,2 151,7±16,7
1,5 27,0±6,7 35,2 ± 2,2**
7,5 33,5±3,7 69,7 ± 3,8**
Ондансетрон 0,1 33,0±2,0 149,2±14,9
1,0 31,2±3,7 242,3±12,6
5,0 25,2±3,9 174,2±15,0
Диклофенак натрия 2 8,8±2,3** 212,2±19,1

Примечания: * – достоверно по отношению к интактному контролю (p0,05, критерий Краскела-Уоллиса с постобработкой критерием Данна), ** – достоверно по отношению к формалиновой гипералгезии (p0,05, критерий Краскела-Уоллиса с постобработкой критерием Данна)

Известно, что серотониновая нейропередача находится в кооперативном взаимодействии с другими нейромедиаторными системами организма, и изменение состояния одной из них неизбежно влечёт за собой изменения в функционировании других [Frber L. et al., 2004; Song Z. et al., 2011]. Это явилось предпосылкой для детального фармакологического анализа эффектов соединения РУ1276 с целью уточнения возможных аспектов механизма его действия.

В серии экспериментов in vitro, позволяющих оценить влияние на 5HT4-рецепторы, изучаемое вещество не проявило способности к взаимодействию с данным рецепторным типом. Оно оказалось неактивно и при изучении 5-HT2А-серотонинергической активности на модели серотонин-индуцированной активации тромбоцитов, что подтверждается также результатами поведенческого теста с введением 5гидрокси-L-триптофана, в котором вещество РУ-1276 не продемонстрировало влияния на специфический, вызванный 5ГТФ, гиперкинез у мышей. В совокупности полученные данные убедительно свидетельствуют о высокой степени селективности действия вещества РУ-1276 в отношении третьего типа рецепторов серотонина по сравнению с другими типами 5-HT-чувствительных клеточных структур.

При изучении влияния на холинергическую нейропередачу было показано, что для исследуемого соединения нехарактерно изменение никотинового тремора. Однако в тесте с М-холиномиметиком ареколином вещество РУ-1276 в дозе 7,5 мг/кг сокращало длительность тремора на 24,1%, что позволяет сделать вывод о способности у него влиять на передачу импульсов в структурах Мхолинергической нервной системы. В опытах с модуляторами функционального состояния адренергической системы было выявлено, что изучаемое соединение не оказывает влияния на эффекты клофелина и резерпина, что является косвенным показателем отсутствия у него действия на центральную адренергическую нейромедиацию. При дальнейшем изучении выяснилось, что вещество РУ-1276 не изменяет эффекты D2-антагониста галоперидола, что свидетельствует об отсутствии у него дофаминергического влияния. Эти данные согласуются с обсуждавшимися ранее результатами тестов с апоморфином.

В то же время, была обнаружена способность соединения РУ-1276 усиливать эффекты низких доз L-ДОФА. Так, показатель интенсивности стереотипии на фоне соединения РУ-1276 в дозе 7,5 мг/кг составил 1,2-1,3 балла. Эти данные, возможно, указывают на наличие РУ-1276 некоторого МАО-ингибирующего действия.

При оценке влияния на ГАМК-ергическую нейропередачу вещество РУ-1276 в дозе 7,5 мг/кг приводило к статистически значимому повышению числа судорожных приступов у экспериментальных животных в 2,1 раза по сравнению с контрольным значением (табл. 9), что говорит об усилении в его присутствии эффектов ГАМКА-антагониста пикротоксина.

Таблица 9

Влияние соединения РУ-1276 на эффекты пикротоксина (M±m)

Вещество Доза, мг/кг Латентный период тремора, с Латентный период судорог, с Количество судорожных приступов
Контроль (физ.раствор + пикротоксин) 291,0±25,5 471,5±40,8 7,7±1,2
РУ-1276 + пикротоксин 1,5 258,0±25,8 487,2±29,3 6,0±1,5
7,5 315,7±25,5 461,0±41,0 16,2±1,3*




Примечание: * – данные достоверны по отношению к контролю (p0,05, критерий Краскела-Уоллиса с постобработкой критерием Данна)

Таким образом, было установлено, что в реализации нейротропных эффектов соединения РУ-1276 участвует ряд медиаторных систем, включющий, как минимум, холинергическую и ГАМК-ергическую системы. Эти результаты во многом согласуются с имеющимися на сегодня в литературе данными о взаимном влиянии и кооперации между собой нейромедиаторных систем ЦНС [Song Z. et al., 2011; Tozzi A. et al., 2011; Ortega J. et al., 2012].

На заключительном этапе исследований изучался нейротоксический профиль вещества РУ-1276. Было установлено, что в однократной средней терапевтической дозе (1,5 мг/кг), равно как и при увеличении её в два с половиной раза, соединение не оказывало нежелательного действия. Первые побочные эффекты в виде некоторого уменьшения двигательной активности животных были отмечены при введении дозы, пятикратно превышающей среднюю терапевтическую и соответствующей 7,5 мг/кг. Выраженный характер отклонений  неврологического статуса животных от нормы наблюдался у соединения РУ-1276 лишь в максимальной вводимой дозе (26 мг/кг), в 17 раз превышающей среднюю терапевтическую дозу, и выражался в появлении шаткой либо расползающейся походки, значительном угнетении различных видов активности (показатель горизонтальной активности в «открытом поле» был снижен на 73,7% относительно контрольного значения; практически отсутствовали вертикальные стойки; показатель поисковой активности составил от 17,5% до 7,5% от контрольных значений; было уменьшено количество актов груминга, а также полностью отсутствовали выходы животных в центр площадки), выраженном снижении мышечного тонуса (0 баллов по 4х-балльной шкале при удержании на проволочном стержне; 2,3 балла по 4х-балльной шкале при удержании на сетке; 9,0 из 30 секунд при удержании на вращающемся стержне; полном угнетении ипселатерального сгибательного рефлекса), снижении слухового рефлекса на 30% и снижении частоты дыхания на 18,5% по сравнению с контрольными значениями.

Таким образом, по результатам экспериментального поиска 5HT3блокаторов среди новых производных индола и бензимидазола с предшествующим прогнозом уровня активности средствами ИТ «Микрокосм» v.5.2 было установлено, что наиболее выраженными 5HT3антагонистическими свойствами обладают N1-замещённые имидазо[1,2-]бензимидазола. Максимально выраженное действие обусловливается наличием пирролидино-/пиперидинопропильного заместителя у 1-го атома азота и 4фторфенильного заместителя у 2-го атома углерода гетероциклического ядра, а также показатели липофильности целой молекулы и заместителя в N1-положении и зарядовые характеристики атомов в составе радикалов в N1 и C2 положениях.

В ходе работы было найдено соединение под лабораторным шифром РУ-1276, демонстрировавшее высокий уровень антагонистической активности в отношении третьего типа серотониновых рецепторов. В дальнейшем были изучены его противорвотные, противодиарейные, анксиолитические и анальгетические свойства, а также токсикологические параметры. Кроме того, для изучаемого вещества с использованием комплекса моделей in vivo и in vitro был проведён анализ возможных аспектов механизма действия.

Наличие у изучаемого соединения РУ-1276 выраженных антиеметических, а также противодиарейных, транквилизирующих и анальгетических эффектов позволяет рассматривать его как перспективное вещество для дальнейших расширенных доклинических фармакологических исследований.

Выводы.

  1. N1-замещённые имидазо[1,2-]бензимидазола, амиды 2-амино-3-индолилакриловых кислот и 1,2-аминоспирты ряда индола являются перспективными классами веществ для поиска 5-HT3-антагонистов. Три из пяти изученных 1,2-аминоспиртов индольного ряда и 8 из 13 изученных амидов 2-амино-3-индолилакриловых кислот обладали умеренно выраженным 5-HT3-блокирующим действием. Среди 9 изученных N1-замещённых имидазо[1,2-]бензимидазола 5HT3-антисеротониновые свойства были выявлены у 6 соединений, из них 2 превосходили по уровню активности препарат сравнения ондансетрон. Среди 9 изученных N9-замещённых имидазо[1,2-]бензимидазола лишь одно соединений проявило статистически значимый уровень 5-HT3-блокирующего действия.
  2. Прогноз in silico уровня 5-HT3-блокирующей активности производных индола и бензимидазола с применением методов 2D-QSAR анализа является эффективным средством оптимизации направленного поиска новых 5-HT3-антагонистов.
  3. Высокий уровень 5-HT3-блокирующего эффекта N1замещённых имидазо[1,2]бензимидазола определяется наличием пирролидино- либо пиперидинопропильного заместителя в N1-положении и 4фторфенильного радикала у 2-го атома углерода гетероциклического ядра; высокими значениями показателя липофильности ядра и радикала в N1-положении и максимального положительного заряда на атомах этого же заместителя, а также низким значением среднего заряда атомов радикала в С2 положении. Для производных индола наибольший вклад в развитие 5-HT3-антисеротонинового действия вносит сочетание в структуре молекулы этильной группировки в качестве заместителя в положении N9 с наличием диэтиламиноэтильного остатка и фенильного кольца в составе радикала у 7-го углеродного атома.
  4. Наиболее выраженная 5-НТ3-антагонистическая активность выявлена у вещества под лабораторным шифром РУ1276, превосходящего препарат сравнения ондансетрон по условному терапевтическому индексу в 1,6 раза.
  5. Вещество РУ-1276 в дозах 0,1 и 1 мг/кг на модели цисплатин-индуцированной рвоты у собак обладает противорвотной активностью, по степени выраженности равной активности препарата сравнения ондансетрона.
  6. Вещество РУ-1276 при однократном внутрибрюшинном введении в дозе 1,5 мг/кг проявляет анксиолитические эффекты на неконфликтных моделях анксиогенеза, а также в дозах 1,5 и 7,5 мг/кг обладает периферической анальгетической активностью на модели адъювантного артрита и во второй фазе формалинового теста.
  7. Соединение РУ-1276 в дозе 7,5 мг/кг на моделях экспериментальной дисфункции кишечника оказывает противодиарейное действие, по степени выраженности равное активности препарата сравнения лоперамида.
  8. Соединение РУ-1276 неактивно в отношении 5-HT2A- и 5-HT4-рецепторов in vitro. В тестах по взаимодействию с модуляторами основных нейромедиаторных систем ЦНС не изменяет эффекты 5гидрокситриптофана, никотина, апоморфина, галоперидола, клофелина; однако влияет на состояние Мхолинергических, ГАМКергических структур и активность МАО, модулируя эффекты ареколина, пикротоксина, LДОФА и фенамина.
  9. Соединение РУ-1276 в средней терапевтической дозе 1,5 мг/кг не обладает нейротоксическим действием. При пятикратном увеличении средней терапевтической дозы отмечается снижение подвижности животных. В пятнадцатикратной дозе наблюдается появление миорелаксирующего эффекта. В дозе, в семнадцать раз превышающей среднюю терапевтическую, к спектру побочного действия добавляется угнетение исследовательской и эмоциональной активности животных, ослабление рефлекторных реакций и снижение частоты дыхания.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

  1. Колобродова, Н.А. Производные индола и бензимидазола: перспективы поиска новых 5-HT3-антагонистов / Н.А. Колобродова, И.А. Дубина, Д.С. Яковлев // Вестник РГМУ. Периодический медицинский журнал. М.: ГОУ ВПО РГМУ Росздрава. 2009, №3. С. 253.
  2. Колобродова, Н.А. Изучение острой токсичности нового соединения с 5-HT3-антагонистическими свойствами / Н.А. Колобродова, Ф.Ю. Верхоломова, Д.С. Яковлев // Вестник РГМУ. Периодический медицинский журнал. М.: ГОУ ВПО РГМУ Росздрава. 2010, №3. С. 501.

  3. Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 ||
     




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.