WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 6 |

Клинико-фармакологические подходы к повышению эффективности и безопасности применения лекарственных средств в педиатрической практике

-- [ Страница 2 ] --
  1. Фармакогенетическое тестирование детей из различных этнических групп, проживающих на территории Астраханского региона, выявило высокую частоту встречаемости полиморфных генотипов по ферментам I фазы биотрансформации лекарственных средств (CYP1A2, CYP2C19, CYP2D6).
  2. Распространенность генотипов CYP1A2, CYP2C19, CYP2D6, ассоциированных с быстрым и медленным метаболизмом лекарственных средств, у детей, проживающих на территории нижнего Поволжья, отличается от жителей других субъектов Российской Федерации и зарубежных стран.
  3. По частоте встречаемости генотипов CYP1A2, ассоциированных с быстрым и медленным метаболизмом лекарственных средств-субстратов CYP1A2, у детей русской, татарской, ингушской, чеченской и калмыцкой национальностей, проживающих на территории Астраханского региона, статистически значимых различий не выявляется.
  4. Анализ распределения частот генотипов CYP2C19, ассоциированных с быстрым и медленным метаболизмом лекарственных средств-субстратов CYP2C19, у детей русской, калмыцкой, татарской, ингушской и чеченской национальностей, проживающих на территории Астраханского региона, выявил наличие этнической специфичности.
  5. Получены достоверные различия в частотах распределения генотипов CYP2D6, ассоциированных с быстрым и медленным метаболизмом лекарственных средств - субстратов CYP2D6, в этнических группах детей, проживающих на территории Астраханского региона.
  6. Имеются различия в активности изофермента CYP3A4 в зависимости от возраста и пола ребенка. Максимальная активность CYP3A4 выявлена в группе детей от 3-х до 9 лет, минимальная у детей женского пола в возрасте от 0 до 3-х лет.
  7. Имеются различия в активности II фазы биотрансформации (по маркеру содержания восстановленного глутатиона в крови) у детей с неоднородной соматической патологией на фоне проводимой фармакотерапии.
  8. С учетом распределения частот генотипов и фенотипов по ферментам I и II фаз биотрансформации лекарственных средств у детей различных этнических групп, проживающих на территории Астраханского региона, обоснованы клинико-фармакологические подходы к повышению эффективности и безопасности применения ЛС в педиатрической практике, на примере эпилепсии и бронхиальной астмы.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и освещены в работе 80-й итоговой научно-практической конференции сотрудников Астраханской государственной медицинской академии, врачей города и области (г. Астрахань, 2003 г.); II Астраханской Областной НПК «Лекарство и здоровье человека» (г. Астрахань, 2003 г.); Конгресса «Клиническая фармакология. Новые перспективы и достижения» (г. Москва, 2004 г.); 81-й итоговой научно-практической конференции сотрудников Астраханской государственной медицинской академии, врачей города и области (г. Астрахань, 2004 г.); IV Астраханской Областной НПК «Лекарство и здоровье человека» (г. Астрахань, 2005 г.); VI Астраханской Областной НПК «Лекарство и здоровье человека» (г. Астрахань, 2007 г.); 84-й итоговой научно-практической конференции сотрудников Астраханской государственной медицинской академии, врачей города и области (г. Астрахань, 2007 г.); VII Астраханской Областной НПК «Лекарство и здоровье человека» (г. Астрахань, 2008 г.); XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (г. Москва, 2009 г.); 86-й итоговой научно-практической конференции сотрудников Астраханской государственной медицинской академии, врачей города и области (г. Астрахань, 2009 г.), в работе Московского Международного Салона изобретений и инновационных технологий «Архимед» (г. Москва 2010 г., 2011 г.); II Региональной конференции молодых ученых и инноваторов «Инно-Каспий» (г. Астрахань, 2011 г.); II Российского конгресса с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины – возможное и реальное» (г. Санкт-Петербург, 2012 г.); XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (г. Москва, 2012 г.); IV съезда фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (г. Казань, 2012); III Межрегиональной научно-практической конференции «Инфекционные болезни взрослых и детей. Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики» (г. Астрахань, 24 - 25 сентября 2012); Астраханском научном обществе врачей-педиатров (20 декабря 2012 г., г. Астрахань).

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе кафедры педиатрии лечебного факультета ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России при преподавании дисциплин у студентов 4 - 6 курсов лечебного и педиатрического факультетов. Итоговые материалы исследования внедрены в практику работы пульмонологического и неврологического отделения ГБУЗ «Городская детская клиническая больница № 2», Правобережной больницы Федерального государственного учреждения г. Астрахани.

Связь с планом научных исследований

Диссертация выполнена в соответствии с планом НИР ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России по научному направлению «Возрастные особенности детского организма в норме и патологии», в рамках реализации гранта Президента Российской Федерации по государственной поддержке молодых ученых – кандидатов наук за проект «Разработка алгоритмов персонализированной фармакотерапии в педиатрии на примере Астраханского региона» (МК-1767.2011.7); комплексной кафедральной научно-исследовательской работы кафедры педиатрии лечебного факультета ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России «Персонализированная фармакотерапия в педиатрии», в соответствии с государственным заданием Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации «Фармакогенетические исследования в педиатрии» (от 26.12.2011 г.). Номер государственной регистрации в ЦИТИС г. Москва № 01201168087.





Публикации

По материалам диссертации опубликовано 47 работ, из них 14 в журналах, рекомендованных ВАК. Получено 3 патента на изобретение.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, глав, включающих литературный обзор, описание материалов и методов исследования, результаты собственных исследований и обсуждение результатов, выводы, заключение, практические рекомендации и указатель используемой литературы. Диссертация изложена на 235 страницах, иллюстрирована 38 таблицами и 56 рисунками. Список литературы включает 203 отечественных и 212 иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Научное исследование состояло из трех этапов (рис. 1). На первом этапе изучался генетический полиморфизм генов изоферментов цитохрома Р-450, участвующих в первой фазе биотрансформации ЛС и ксенобиотиков: CYP2C19, CYP1A2, CYP2D6.

Выбор исследования полиморфизма именно этих генов обусловлен тем, что данные ферменты принимают участие в метаболизме лекарственных препаратов, в том числе и с узким терапевтическим диапазоном, довольно часто назначаемых в педиатрической практике, таких как нестероидные противовоспалительные средства (НПВС), парацетамол, метилксантины, антиэпилептические препараты, антисекреторные средства. На I этапе исследования оценивалась также фенотипическая активность изофермента CYP3А4. Определение фенотипической активности CYP3А4 проводилось по изучению соотношения 6-гидроксикортизола к кортизолу мочи (рис. 1).

На втором этапе оценивалась фенотипическая активность одного из эндогенных субстратов II фазы биотрансформации ЛС – восстановленного глутатиона крови (рис.1). В группу исследования вошли дети, страдающие эпилепсией, бронхиальной астмой, атопическим дерматитом и внебольничной пневмонией (n=226).

На третьем этапе исследования по результатам фармакогенетических и фенотипических исследований системы биотрансформации у детей были разработаны и обоснованы клинико-фармакологические подходы к повышению эффективности и безопасности применения ЛС в педиатрической практике (рис.1). В качестве примера были взяты два педиатрических заболевания, фармакотерапия которых предполагает применение ЛС с узким терапевтическим диапазоном – теофиллинов и антиэпилептических препаратов.

Научное исследование одобрено этическим комитетом ГБОУ ВПО АГМА Минздрава России (протокол № 10 от 12.11.2010 года). В фармакогенетическом тестировании приняли участие 250 детей различных этнических групп: русские, калмыки, ингуши, чеченцы, татары. В каждую этническую группу были отобраны 50 человек. Возраст обследуемых от 2-х до 18 лет.

Выбор данных этнических групп был обусловлен несколькими обстоятельствами. Многолетние личные клинические наблюдения позволили отметить более частое возникновение побочных реакций у детей - представителей калмыцкой, чеченской и ингушской этнических групп. Русских, татар и калмыков можно считать коренным населением Астраханской области, в то время как ингуши и чеченцы, появившиеся сравнительно недавно, могут считаться пришлыми этническими группами.

Рис. 1

Дизайн исследования

Обследование проводилось при добровольном согласии ребенка или его родителей, после ознакомления с целями и задачами исследования. Этническая принадлежность определялась тем, как себя сами идентифицировали оба родителя ребенка. При формировании этнических групп в исследование не вошли дети, рожденные от смешанных браков, близкие родственники в пределах одной семьи (братья и сестры). В качестве биологического материала использовалась цельная кровь, полученная из кубитальной вены, собранная в пробирки с ЭДТА. Определение полиморфизма генов CYP2C19, CYP1A2, CYP2D6 осуществляли методами полимеразной цепной реакции, предварительно выделив ДНК из образцов крови в лаборатории научно-исследовательского института акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта Северо-Западного отделения РАМН, г. Санкт-Петербург1.

Визуализацию аллелей СYP2D6, CYP2C19 осуществляли на биочипах (“Биочип-ИМБ”, Россия). Флуоресцентный сигнал от ячеек микрочипа регистрировали с помощью широкопольного люминесцентного микроскопа, снабженного камерой ПЗС и программным обеспечением Imageware (“Биочип-ИМБ”, Россия).

Активность­ изофермент­а CYP1A2 убывает у лиц в ряду генотипов CC, СА, АА (Obase Y., Shimoda T. 2003 г., Uslu A., Ogus C. 2010 г., Lim J.S. 2010 г., Bilgen T 2008 г.), поэтому условно детей с генотипом СС мы обозначали­ как «быстрые» метаболиза­торы, в то время как носительст­во генотипов СА и АА, ассоцииров­ано с более медленной скоростью биотрансфо­рмации ЛС - субстратов­ CYP1A2.

Отечественными и зарубежными исследователями показано, что активность CYP2D6 и СYP2C19 убывает у лиц в ряду генотипов GG, GA, АА (Казаков Р.Е. 2009 г., Ахмадишина Л.З. 2007 г., Ахматьянова В.Р. 2010 г., Kim K.A. 2009 г., Azarpira N. 2010 г., Brackbill M.L. 2009 г.). Условно детей с генотипом GG мы обозначали­ как «быстрые» метаболиза­торы, в то время как носительст­во генотипов GA, АА, ассоцииров­ано с более медленной скоростью биотрансфо­рмации ЛС - субстратов­ CYP2D6 и СYP2C19.

Фенотипическую активность изофермента CYP3А4 изучали путем вычисления соотношения 6-гидроксикортизола к кортизолу мочи. Кортизол и его метаболит 6-гидроксикортизол определяли в моче 50 здоровых детей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией в лаборатории «ХромсистемсЛаб» г. Москва2

. Возраст детей от 0 до 17 лет. Детей женского пола было 19 человек, мужского 31.

Анализ проб производился с помощью жидкостного тандемного хромато-масс-спектрометра Agilent Technologies 6410 Triple Quad LC/MS с автосэмплером, состоящего из двойного градиентного насоса серии Agilent 1200, вакуумного дегазатора, аналитической колонки Zorbax Eclipse XDB8–C18 (4.0х150 мм; размер частиц 5 мкм), оснащённой контроллером температуры. Полученные данные анализировались с помощью программного обеспечения Agilent Data Analysis для анализа и идентификации хроматографических пиков. В конечном итоге, вычислялась концентрация определённого метаболита в моче (мг/сут).

Концентрацию восстановленного глутатиона крови определяли титрованием по методу Вудворта-Фрей (Удинцев Г. Н., Бланк В. Б., Кравец Д. А., Тимесков И. С., 1986 г.). В качестве исследуемого материала использовалась венозная кровь 226 детей, больных различными соматическими заболеваниями и получающими стационарную помощь в условиях Городской детской клинической больницы № 2 г. Астрахани с 2003 г. по 2009 г3.

Статистическую обработку результатов осуществляли методами непараметрической статистики с использованием программы GraphPad. Для изучения распределения частот генотипов использовали метод 2 (уравнение Пирсона с поправкой Йетса) и метод Фишера. Для изучения репрезентативности групп исследования использовали уравнение Харди-Вайнберга. Определение соответствия частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга в популяциях детей проводили методом 2 по формуле: 2 = (N1N3 – 1 4N22)2N (n12n22) (Животовский, 1991), где N1, N2 и N3 – численности генотипов XX, Xx и xx, а N – общий объём выборки, n1 и n2 – число аллелей исследуемых генов в выборке. Соответствие уравнению Харди-Вайнберга считали достоверным при p>0,05.

Для изучения фенотипической активности CYP3A4 и восстановленного глутатиона крови проводили статистический анализ полученных данных с помощью современных систем компьютерной обработки и пакета программ «MS Exel XP», «Statistica 6,0». Для каждой выборки вычисляли средние величины (М), среднее квадратичное отклонение (), среднюю ошибки средней арифметической (m). С целью определения значимости (достоверности) р различий сопоставляемых средних величин применялся критерий t Стьюдента. Разницу средних величин считали достоверной при р < 0,05.

Результаты исследования

При изучении равновесного распределения частот генотипов CYP1А2 по полиморфному маркеру С734A, CYP2D6 по полиморфному маркеру G1934A, CYP2C19 по маркеру G681A согласно уравнению Харди-Вайнберга, было установлено, что частоты распределения генотипов изучаемых изоферментов в общей группе исследования (n=250) распределены равновесно, что свидетельствует о сохранении законов передачи наследственной информации и позволяет судить о репрезентативности полученных результатов (р>0,05) (табл.1).

Таблица 1

Изоферменты цитохрома Р450

Генотипы

Этнические группы детей

Русские (n=50)

Татары (n=50)

Калмыки (n=50)

Чеченцы (n=50)

Ингуши (n=50)

CYP1A2 (по полиморфному маркеру С734A)

СС

18 (36%)

25 (50%)

26 (51%)

21 (42%)

26 (52%)

СA+AA

32 (64%)

25(50%)

24 (49%)

29(58%)

24(48%)

CYP2C19 (по полиморфному маркеру G681A)

GG

38 (77%)

40 (80%)

31 (62%)

41 (82%)

44 (88%)

GA+AA

12 (23%)

10(20%)

19 (38%)*



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 6 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.