WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 6 |

Сравнительное изучение психотропных свойств и аспектов механизмов действия нейроглутамина и его композиций с органическими кислотами

-- [ Страница 2 ] --

Исследование проведено на 533 нелинейных половозрелых белых лабораторных мышах (21-25 г) и 665 крысах (180-220 г) 3,5 – 4-хмесячного возраста, полученных из Питомника лабораторных животных «Столбовая» РАМН, ФГУП «Питомника лабораторных животных «Рапполово» РАМН. Проведение экспериментов и содержание животных соответствовало правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009 и ГОСТ Р-51000.4-2011), Федеральному закону № 61-ФЗ от 12.04.2010 г. «Об обращении лекарственных средств», Приказу Минздравсоцразвития России от 23.08.2010 № 708Н «Об утверждении правил лабораторной практики» (GLP), ГОСТ Р-53434-2009, с учетом международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997). Изучение нейропсихотропных эффектов нейроглутамина проведено с использованием стандартных нейропсихофармакологических моделей и методов, изложенных в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» - Фармакологический государственный комитет, МЗ РФ, Москва, 2005», «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» - ч. 1, Москва, 2012: «открытое поле» (ОП), «приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ), «условная реакция пассивного избегания» (УРПИ), «тест экстраполяционного избавления» (ТЭИ), «принудительное неизбегаемое плавание» по Порсолту, «потребление/предпочтение сахарозы» (П/ПС), «подвешивание мышей за хвост» (ПМХ), «конфликтная ситуация по Vogel», «подвешивание на горизонтальной сетке», «принудительное плавание с грузом», «раздражение лап электрическим током до вокализации», модели неконкурентного и конкурентного агрессивного поведения в условиях спровоцированной внутривидовой агрессии, «tail immersion», «пролонгирование снотворного действия барбитуратов», «максимальный электрошок» (МЭШ), «пикротоксиновые судороги», «выученная беспомощность», взаимодействие с фенилэтиламином.

На этапе скринингового изучения нейропсихотропных свойств нейроглутамин (РГПУ-135), яблочную, янтарную, лимонную и салициловую кислоты вводили крысам в дозе 26 мг/кг; композиции с лимонной (РГПУ-222), янтарной (РГПУ-223), яблочной (РГПУ-233), салициловой (РГПУ-234) кислотами – 52 мг/кг, соединение РГПУ-197 – 22 мг/кг внутрижелудочно в 2%-ой крахмальной слизи за 60 минут до проведения тестов. На каждом этапе исследования формировались контрольные группы животных, которые получали дистиллированную воду либо 2%-ую крахмальную слизь.

Острую токсичность нейроглутамина, его композиций и соединения РГПУ-197 изучали на мышах самцах при внутрибрюшинном введении по методу Литчфилда и Уилкоксона2. Вещества и композиции растворяли в дистиллированной воде и вводили животным в возрастающих токсических дозах из расчета 2 мл/100 г массы тела животного. Углубленное изучение острой токсичности субстанции нейроглутамина проводили на 2-х видах лабораторных животных (мышах и крысах) с использованием 2-х путей введения (внутрижелудочного и внутрибрюшинного) по аналогичной схеме.

При изучении зависимости нейропсихотропного действия от дозы использовали тесты: ОП, ПКЛ, Vogel, Порсолта, УРПИ, ТЭИ, «неконкурентного агрессивного поведения». Нейроглутамин растворяли в 2%-ой крахмальной слизи и вводили крысам внутрижелудочно за 1 ч до проведения тестов в дозах: экспериментально доказанная терапевтически эффективная 26 мг/кг, составляющая порядка 1/300 от LD50; 13 мг/кг – доза, в 2 раза меньшая, чем терапевтически эффективная, приближающаяся к 1/600 от LD50; 52 мг/кг – доза в 2 раза большая, чем терапевтически эффективная, приближающаяся к 1/150 от LD50; 78 мг/кг – доза в 3 раза большая, чем терапевтически эффективная, приближающаяся к 1/100 от LD50; 130 мг/кг – доза в 5 раз большая, чем терапевтически эффективная, приближающаяся к 1/60 от LD50; 650 мг/кг - приближающуюся к 1/10 от LD50, в 25 раз большая, чем терапевтически эффективная (субтоксическая).

Острую токсичность лекарственной формы нейроглутамина3 в виде таблеток, полученных с использованием в качестве вспомогательных веществ полипласдона XL-10, кальция фосфорнокислого двузамещенного и кальция стеариновокислого, изучали на 2х-видах лабораторных животных (мышах и крысах) при пероральном введении. При сравнении нейропсихотропных эффектов лекарственной формы и субстанции нейроглутамина, их вводили крысам в дозе 26 мг/кг внутрижелудочно в 2%-ой крахмальной слизи за 1ч до проведения тестов: ОП, ПКЛ, Порсолта, УРПИ, ТЭИ, «конкурентное и неконкурентное агрессивное поведение».

Толерантность к нейроглутамину при 14-тидневном, 1- и 6-тимесячном интрагастральном введения самцам и самкам крыс в дозах 26, 130 и 650 мг/кг изучали в тестах ОП, ПКЛ, Порсолта, УРПИ и ТЭИ4. Полученные данные сравнивали с эффектами 1-кратного введения нейроглутамина в тех же дозах. Изучение возможного синдрома отмены после 6-месячного интрагастрального введения нейроглутамина в дозах 26, 130 и 650 мг/кг проводили через 1 нед., а затем через 1 мес. после отмены в тех же тестах.

Углубленное изучение антидепрессивной активности нейроглутамина (26 мг/кг) проводили на модели «выученной беспомощности» с использованием препаратов сравнения: амитриптилин (10 мг/кг), имипрамин (15 мг/кг), флуоксетин (20 мг/кг), пароксетин (10 мг/кг), сертралин (10 мг/кг), венлафаксин (10 мг/кг).

Изучение аспектов механизмов действия нейроглутамина проводили исходя из анализа его химической структуры с использованием основных тестов, в которых выявлена его фармакологическая активность.





На различных этапах исследования применяли следующие вещества и препараты сравнения: амитриптилин (р-р 10 мг/мл; ФГУП «Московский эндокринный завод», Москва, Россия); имипрамин (Мелипрамин, р-р 25 мг/2 мл; ОАО Фармацевтический завод ЭГИС, Будапешт, Венгрия); сертралин (Стимулотон, таб., покр. пл. об. 100 мг; ОАО Фармацевтический завод ЭГИС, Будапешт, Венгрия); пароксетин (Паксил, таб., покр. об. 20 мг; Брашов, Румыния; GlaxoSmithKline); флуоксетин (Флуоксетин-Канон, капс. 20 мг; ЗАО «Канонфарма продакшн», Щелково, Россия); венлафаксин (Велаксин, таб. 75 мг; ОАО Фармацевтический завод ЭГИС, Будапешт, Венгрия); фенилэтиламин (Sigma-Aldrich, Германия); пикротоксин (Сигма-Алдрич, Германия); тиопентал натрий (лиофилизат для приготовления р-ра для в/в введения 1 г; Синтез АКО ОАО, Россия); янтарная кислота (ACS, США); яблочная кислота (AppliChem, Германия); лимонная кислота (AppliChem, Германия); салициловая кислота (Panreac; Barcelona, Espaa); L-глутаминовая кислота (Panreac; Barcelona, Espaa); фенибут (субстанция, получена на каф. органической химии РГПУ им. А.И. Герцена, Санкт-Петербург, Россия); фенотропил (субстанция, получена на каф. органической химии РГПУ им. А.И. Герцена, Санкт-Петербург, Россия); глицин (AppliChem, Германия), гамма-аминомасляная кислота (Sigma-Aldrich, Германия); крахмал картофельный (ГОСТ 7699-78, высший сорт, Беларусь).

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакетов программ: Microsoft Office Excel 2007, (Microsoft, США), Statistica 6,0 (StatSoft, Inc., США), BioStat 2008 Professional 5.1.3.1. В зависимости от характера данных использовали: ранговый однофакторный дисперсионный анализ Краскела-Уоллиса в сочетании с апостериорными критериями Ньюмена-Кейлса (множественные сравнения для выборок одинакового объема) или Дана (множественные сравнения для выборок разного объема); точный критерий Фишера; непараметрический U-критерий Манна-Уитни, линейный регрессионный анализ. Для проверки распределения на нормальность использовали критерий Шапиро-Уилка. Статистически значимыми расценивались эффекты при p<0,05 (Гланц С., 1988; Зайцев В.М., Лифляндский В.Г., Маринкин В.И., 2003; Кобзарь А.И., 2003; Ивантер Э. В., Коросов А. В., 2011; Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., Маевский Е.И., 2012).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В тесте Порсолта нейроглутамин, все его композиции, а также соединение РГПУ-197 проявили антидепрессивное действие: статистически значимо уменьшали длительность иммобилизации и увеличивали количество прыжков по сравнению с контрольными животными, причем нейроглутамин был статистически значимо более активен, чем его композиции (рис. 1). Глутаминовая кислота увеличивала количество прыжков у животных, что может быть связано с ее активирующим действием. Остальные кислоты не оказывали статистически значимого влияния на показатели данного теста.

 Влияние соединений на поведение животных в «тесте-0

 Влияние соединений на поведение животных в «тесте принудительного-1

 Влияние соединений на поведение животных в «тесте принудительного-2

 Влияние соединений на поведение животных в «тесте принудительного-3

Рис. 1. Влияние соединений на поведение животных в «тесте принудительного неизбегаемого плавания» по Порсолту (n=8). Обозначения: * - р<0,05; ** - р<0,01 – по сравнению с контрольной группой животных; # - р<0,05; ## - р<0,01 – по сравнению с группой животных, получавших нейроглутамин (ранговый однофакторный анализ Краскела-Уоллиса, критерий Ньюмена-Кейлса).

В ОП нейроглутамин, его композиция с янтарной кислотой и, в меньшей степени, соединение РГПУ-197, глутаминовая кислота оказывали активирующее действие: увеличивали двигательную и исследовательскую активность (рис. 2). У салициловой кислоты отмечались седативные свойства, что выражалось в уменьшении исследовательской и двигательной активности. Янтарная кислота проявляла тенденцию к активирующему действию, однако ее эффекты не были статистически значимыми.

 Влияние соединений на спонтанную двигательную и-4

 Влияние соединений на спонтанную двигательную и-5

 Влияние соединений на спонтанную двигательную и-6

 Влияние соединений на спонтанную двигательную и-7

Рис. 2. Влияние соединений на спонтанную двигательную и ориентировочно-исследовательскую активность животных в тесте «открытое поле» (n=8). Обозначения: * - р<0,05; ** - р<0,01 – по сравнению с контрольной группой животных; # - р<0,05; ## - р<0,01 – по сравнению с группой животных, получавших нейроглутамин (ранговый однофакторный анализ Краскела-Уоллиса, критерий Ньюмена-Кейлса).

В конфликтной ситуации по Vogel, нейроглутамин, все его композиции, а также соединение РГПУ-197 проявили анксиолитическую активность: статистически значимо уменьшали ЛП первого наказуемого подхода к поилке и увеличивали число наказуемых подходов (рис. 3). Наиболее выраженный анксиолитический эффект отмечался у нейроглутамина и композиции РГПУ-223. Соединение РГПУ-197 было статистически значимо менее активно, чем нейроглутамин.

 Влияние соединений на поведение животных в конфликтной ситуации-8

 Влияние соединений на поведение животных в конфликтной ситуации-9

 Влияние соединений на поведение животных в конфликтной ситуации по-10

 Влияние соединений на поведение животных в конфликтной ситуации по-11

Рис. 3. Влияние соединений на поведение животных в конфликтной ситуации по Vogel (n=8). Обозначения: ЛП – латентный период; * - р<0,05; ** - р<0,01 – по сравнению с контрольной группой животных; # - р<0,05; ## - р<0,01 – по сравнению с группой животных, получавших нейроглутамин (ранговый однофакторный анализ Краскела-Уоллиса, критерий Ньюмена-Кейлса).

Нейроглутамин, все его композиции, соединение РГПУ-197, глутаминовая и янтарная кислоты оказывали ноотропное действие: в тесте УРПИ увеличивали ЛП первого захода в темный отсек при воспроизведении рефлекса через 14 сут. после обучения, в ТЭИ уменьшали ЛП подныривания через 24 ч и 14 сут. после обучения (рис. 4). Статистически значимый ноотропный эффект отмечался у нейроглутамина, его композиции с лимонной кислотой (РГПУ-222), соединения РГПУ-197 и, в большей степени, у композиции с янтарной кислотой (РГПУ-223).

В тестах с моделированием статической и динамической физической нагрузки соединения РГПУ-135 и РГПУ-197, все изучаемые композиции увеличивали время удержания на сетке и продолжительность плавания до утомления – повышали физическую работоспособность у животных (рис. 5). В наибольшей степени данный эффект проявился у нейроглутамина, композиций РГПУ-222 и РГПУ-223.

 Рис 4. Влияние соединений на обучаемость и память животных в тестах-12

 Рис 4. Влияние соединений на обучаемость и память животных в тестах-13

 Рис 4. Влияние соединений на обучаемость и память животных в тестах-14

 Рис 4. Влияние соединений на обучаемость и память животных в тестах «Условная-15

Рис 4. Влияние соединений на обучаемость и память животных в тестах «Условная реакция пассивного избегания» (а) и «экстраполяционного избавления» (б) (n=8). Обозначения: * - р<0,05; ** - р<0,01 - по сравнению с контрольной группой животных; # - р<0,05 - по сравнению с группой животных, получавших нейроглутамин (ранговый однофакторный анализ Краскела-Уоллиса, критерий Ньюмена-Кейлса).

 Влияние соединений на суммарное время удержания на сетке и-16

 Влияние соединений на суммарное время удержания на сетке и-17

 Влияние соединений на суммарное время удержания на сетке и-18

 Влияние соединений на суммарное время удержания на сетке и-19

Рис. 5. Влияние соединений на суммарное время удержания на сетке и длительность плавания до «полного» утомления животных (n=8). Обозначения: * - р<0,05; * - р<0,01 по сравнению с контрольной группой животных; # - р<0,05 – по сравнению с группой животных, получавших нейроглутамин (ранговый однофакторный анализ Краскела-Уоллиса, критерий Ньюмена-Кейлса).

При генерализованных судорогах, вызванных максимальным электрошоком нейроглутамин, все его композиции, соединение РГПУ-197 не проявили явного противосудорожного действия, но оказывали нейропротекторный эффект, поскольку уменьшали летальность, сокращали длительность комы и увеличивали скорость восстановления спонтанной двигательной активности у животных, перенесших генерализованный судорожный приступ (табл. 1).

Таблица 1.

Влияние соединений на проявления генерализованного судорожного синдрома в тесте «максимальный электрошок (МЭШ)»

Группы животных

Регистрируемые показатели(M±m)

Длительность судорог (с)

Длительность комы (с)

КЛИ N/n (%)

ЛП восстановления спонтанной ДА (с)

1

2

3

4

5

Контроль

75,50±5,19

679,25±48,89

4/8 (50%)

1688,00±89,12



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 6 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.