WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||

Влияние рекомбинантного белка вируса натуральной оспы на биологические эффекты фактора некроза опухолей альфа

-- [ Страница 4 ] --

Примечание: * - достоверные различия по сравнению с I группой (контроль); ** - по сравнению с данными животных II группы; Х – по сравнению с данными мышей III группы (p<0,05).

Таким образом, результаты исследования показали, что развитие КИА сопровождается разрушением соединительной ткани и, по всей видимости, суставов животных. При этом известно, что поражение суставов при аутоиммунных заболеваниях зависит от эффекта действия TNF-, включая индукцию/стимуляцию окислительных процессов эффекторными клетками воспаления, в связи с чем, нами были проведены исследования по оценке окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови мышей.

Результаты исследования показали, что ОМ функция лейкоцитов крови в динамике развития КИА значительно усиливается и сохраняется на высоком уровне до конца срока наблюдения (рис. 10). Введение поли-AbTNF и VARV-CrmB мышам с КИА приводило к достоверному снижению ОМФ лейкоцитов крови. При этом, VARV-CrmB оказывал более выраженный эффект на ОМ функцию лейкоцитов крови мышей с КИА (рис. 6).

 Изменение окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови в-5

Рис. 6. Изменение окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови в динамике развития коллаген-индуцированного артрита у мышей и при введении поли-AbTNF и VARV-CrmB.

* - достоверные различия по сравнению с данными контрольной группы; Х – по сравнению с II группой (КИА) и - по сравнению с III группой (КИА+ поли-AbTNF).

Хронические воспалительные процессы (в т.ч. аутоиммунные, к которым относится ревматоидный артрит) часто сопровождаются формированием анемии. В процессе развития коллаген-индуцированного артрита не наблюдалось достоверного снижение количества эритроидных колоний на 1 неделе исследования; в последующие сроки этот показатель не отличался от контроля. На модели коллаген-индуцированного артрита показано, что введение животным поли-AbTNF и VARV-CrmB приводит к достоверному повышению количества (БОЕ-Э+КОЕ-Э) на 1 неделе (pис. 7).

 Влияние VARV-CrmB и поли-AbTNF на количество БОЕ-Э+КОЕ-Э-6

Рис. 7. Влияние VARV-CrmB и поли-AbTNF на количество БОЕ-Э+КОЕ-Э в процессе развития КИА.

# - достоверно относительно контроля; * - достоверно относительно КИА.

В наших исследованиях не обнаружено анемии у экспериментальных животных в процессе развития КИА. Тем не менее на ранних сроках (1 неделя) поли-AbTNF и VARV-CrmB оказывают достоверный стимулирующий эффект на эритроидное колониеобразование.

Можно предположить, что введение поли-AbTNF и VARV-CrmB приводит к снижению степени активности артрита у мышей на ранних сроках наблюдения. При введении как поли-AbTNF, так и VARV-CrmB на ранних сроках исследования отмечается снижение КАС и содержание ГАГ в сыворотке крови мышей.

Изучение эффектов rmTNF и VARV-CrmB

при эпикутанном способе воздействия

Метод чрезкожной доставки лекарственных средств в составе мазей, гелей и других форм широко применяется в клинической практике. Поэтому было решено исследовать TNF-нейтрализующей способности белка VARV-Crmb при эпикутанном аппликативном методе воздействия. Животные были разделены на 4 группы: I-я (контрольная) группа (15 мышей) – эпикутанная обработка фосфатным солевым раствором (PBS); II-я группа – эпикутанная аппликация rmTNF в дозе 500 нг/мышь (15 мышей); III-я группа – обработка рекомбинантным VARV-CrmB в дозе 500 нг/мышь (15 мышей); IV группа – 500 нг rmTNF + 500 нг VARV-CrmB спустя 30 мин (15 мышей). Животных выводили из эксперимента через 2, 24 и 72 ч после эпикутанных аппликаций.

У мышей всех групп, за исключением животных, обработанных VARV-Crmb, наблюдалось усиление миграции лейкоцитов. При обработке мышей VARV-Crmb миграционная активность клеток не менялась. В то же время практически на всех сроках наблюдения VARV-Crmb достоверно снижал количество мигрирующих лейкоцитов у rmTNF-обработанных мышей (табл. 7).

Показано, что уже через 2 ч после эпикутанной обработки rmTNF- происходит усиление активности ОМ функции лейкоцитов крови мышей, которое достигает максимума через 24 ч, а затем постепенно снижается, достигая контрольных величин к 72 ч наблюдения. При эпикутанной аппликации VARV-CrmB показатель, отражающий ОМ функции лейкоцитов крови мышей, обработанных rmTNF-, значительно снижался, что свидетельствует о TNF-нейтрализующей способности белка (рис. 8).

В работе исследовалось влияние TNF-нейтрализующего рекомбинантного белка VARV-CrmB и rmTNF- при эпикутанном способе воздействия на колониеобразующую активность ККМ мышей.

Таблица 7. Общее количество лейкоцитов крови и их миграционная активность у мышей после аппликации белка VARV-Crmb rmTNF-обработанным животным.

Группы животных n лейкоцитов крови, х106/л / n мигрирующих лейкоцитов, х103
2 ч 24 ч 72 ч
Контроль 4,2±0,7 8,4±3,7 16,0±1,9
7,6±0,8 11,3±0,7 15,3±1,5
TNF- 8,7±0,7* 17,1±0,6* 18,6±2,8
17,8±1,4* 8,2 ±0,9 11,8±1,6
Crmb 7,0±0,5* 18,1±0,9* 12,5±3,7
8,0 ±1,7X 8,7±1,0 7,1± 0,7*
TNF+ Crmb 2,9±0,3*/ X 9,6±1,8 X 15,2±1,5
11,7±1,1 X 10,2 ±1,2 9,7 ± 0,9


* - достоверные различия по сравнению с данными у мышей контрольной группы; X - по сравнению с данными у мышей, обработанных rmTNF-.

 Изменение спонтанного ХЛ ответа лейкоцитов крови после аппликации-7

Рис. 8. Изменение спонтанного ХЛ ответа лейкоцитов крови после аппликации белка VARV-Crmb rmTNF-обработанным мышам.

* - достоверно относительно контроля; ** - достоверно относительно TNF-.

Накожные аппликации rmTNF- в течение трёх суток вызывают статистически достоверное снижение количества эритроидных колоний (БОЕ-Э+КОЕ-Э), в основном за счет поздних КОЕ-Э (рис. 9). Совместное эпикутанное нанесение TNF+VARV-CrmB восстанавливает как количество эритроидных колоний в целом, так и число КОЕ-Э. После аппликации rmTNF- повышается количество КОЕ-ГМ, VARV-Crmb достоверно снижает КОЕ-ГМ относительно rmTNF до уровня контрольных значений. Аналогичные изменения наблюдаются через сутки после однократной аппликации (рис.10).

 Влияние VARV-CrmB и rmTNF- при эпикутанном способе-8

Рис. 9. Влияние VARV-CrmB и rmTNF- при эпикутанном способе воздействия на колониеобразующую активность ККМ мышей (трехкратная аппликация).

# - достоверно относительно контроля, * - достоверно относительно TNF-.

 Влияние VARV-CrmB и rmTNF- при эпикутанном способе-9

Рис. 10. Влияние VARV-CrmB и rmTNF- при эпикутанном способе воздействия на колониеобразующую активность ККМ мышей (однократная аппликация).

# - достоверно относительно контроля, * - достоверно относительно TNF-

Результаты оценки влияния белка VARV-CrmB и rmTNF- на гемопоэз, полученные при использовании эпикутанного способа воздействия, имеют сходства с результатами, полученными в экспериментах in vitro на культуре ККМ мышей.

Рекомбинантный вирусный белок VARV-CrmB, показал свою эффективность в моделях in vitro и in vivo. Совокупность полученных нами данных позволяет рассматривать рекомбинантный вирусный белок VARV-CrmB как новый потенциальный TNF-антагонист, эффекты которого могут быть реализованы за счет его нейтрализующей способности к TNF-индуцированноу снижению колонеобразующей активности ККМ, активации окислительно-метаболической функции и продукции провоспалительных цитокинов эффекторными клетками.


ВЫВОДЫ

  1. VARV-CrmB обладает способностью восстанавливать rmTNF-обусловленное снижение количества эритроидных колоний в метилцеллюлозной культуре клеток костного мозга мыши и человека.
  2. VARV-CrmB обладает свойством отменять эффекты TNF- на продукцию IL-1 и IL-6 в культуре мононуклеарных клеток человека, снижая концентрацию цитокинов до уровня спонтанной продукции.
  3. В культуре мононуклеарных клеток человека VARV-CrmB достоверно снижает TNF-индуцированную генерацию активных метаболитов кислорода.
  4. В модели коллаген-индуцированного артрита введение VARV-CrmB приводит к снижению степени активности артрита, коллагенолитической активности сыворотки и содержания гликозаминогликанов на ранних сроках коллаген-индуцированного артрита.
  5. На ранних сроках развития коллаген-индуцированного артрита введение VARV-CrmB приводит к снижению численности нейтрофильных гранулоцитов и гемопоэтических предшественников, а также к достоверному снижению окислительно-метаболической активности лейкоцитов.
  6. При эпикутанном воздействии VARV-CrmB обладает способностью восстанавливать rmTNF-обусловленное снижение количества эритроидных колоний в метилцеллюлозной культуре клеток костного мозга, нормализует повышенную миграционную и окислительно-метаболическую активность лейкоцитов rmTNF-обработанных мышей.
  7. Белок VARV-CrmB in vitro и in vivo демонстрирует TNF-связывающую способность, оказывая противовоспалительный эффект.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ,





ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Топоркова Л.Б., Петухова А.А., Гилева И.П., Орловская И.А. Рекомбинантный белок вируса натуральной оспы нейтрализует эффекты фактора некроза опухолей на модели костномозгового гемопоэза мышей BALB/С // Медицинская иммунология.- 2010.- № 12, 4-5.- С. 297-304.

2. Цырендоржиев Д.Д., Сенников С.В., Вязовая Е.А., Гилева И.П., Рязанкин И.А., Лебедев Л.Р., Топоркова Л.Б., Курилин В.В., Петухова А.А., Орловская И.А. Влияние рекомбинантного TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на миграционную и окислительнометаболическую функцию лейкоцитов крови мышей при эрикутанной аппликации фактора некроза опухолей // Бюллетень Сибирского отделения РАМН.- 2011.- № 3.- С.73-79.

3. Цырендоржиев Д.Д., Сенников С.В., Орловская И.А., Курилин В.В., Лопатникова Ю.А., Гилева И.П., Щелкунов С.Н., Рязанкин И.А., Басова А.А., Козлов В.А.. Влияние TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на TNF-индуцированную окислительно-метаболическую активность и продукцию IL-1 И IL-6 мононуклеарными клетками здоровых доноров // Иммунология.- 2011.- № 4.- С. 209-213.

4. Петухова А.А., Топоркова Л.Б., Вязовая Е.А., Гилева И.П., Орловская И.А. Влияние рекомбинантного TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на костномозговой гемопоэз мышей Balb/c при эпикутанной аппликации rmTNF. Всероссийская научная конференция «Молекулярно-генетические основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии», г. Новосибирск, Россия, 15-17 сентября 2010. // Цитокины и воспаление.- 2010.- №9.- С. 56.

5. Петухова А. А., Топоркова Л. Б., Гилева И. П., Орловская И. А. Изучение влияния rmTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на костномозговой гемопоэз мышей Balb/c. Всероссийской научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири», г. Красноярск, Россия 2-3 марта 2010.. Сборник материалов конференции.- С.140-142.

6. Басова А. А., Топоркова Л. Б., Гилева И. П., Орловская И. А. Исследование влияния TNF-нейтрализующего белка вируса натуральной оспы на колониеобразующую активность клеток костного мозга человека. 8-я итоговая конференция НИИКИ СО РАМН «Иммуногенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике», г. Новосибирск, Россия, 21-23 июня 2011. Сборник материалов конференции.- С.10.

7. Басова А. А. Топоркова Л. Б., Гилева И. П., Орловская И. А. Исследование влияния TNF-нейтрализующего белка вируса натуральной оспы на костномозговой гемопоэз мышей линии MRL-lpr/lpr. Конференция молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия», г. Санкт-Петербург, Россия, 21 – 22 декабря 2010. Сборник материалов конференции.- С. 16.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.