WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Особенности распределения длины теломер на отдельных хромосомах в лимфоцитах в норме и при иммунопатологических заболеваниях

-- [ Страница 2 ] --

Для обработки изображений использовали программу «TFL-Telo» компании «British Columbia Cancer Research Center». Результативный показатель длины теломер вычислялся как отношение среднего значения интенсивности флуоресценции четырех теломер определенной хромосомы (для каждого из плеч отдельно) к среднему значению интенсивности флуоресценции теломер всех хромосом в метафазе (184 сигнала). Для каждого индивидуума был проведен анализ в среднем пяти метафазных пластинок.

Flow-FISH. Среднюю длину теломер определяли по стандартному протоколу [Борисов В.И., 2007].

Статистическая обработка. Статистический анализ полученных данных проводили с использованием пакета прикладных программ “Statistica 6.0”. Методы описательной статистики применялись на предварительном этапе сопоставления показателей различных групп. На основании варьирования показателя, численности выборок, а также закономерности распределения использовали непараметрические методы представления данных в виде медианы (M) и интерквартильного размаха (25%-75%). Сравнение вариационных рядов осуществлялось с помощью непараметрического U критерия Манна-Уитни парных

сравнений и при помощи теста Фридмана в случае наличия более чем двух зависимых выборок. Корреляционный анализ проводился методом ранговой корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Средняя длина теломер и динамика ее изменения с возрастом в лимфоцитах у здоровых доноров. Для определения средней длины теломер в субпопуляциях лимфоцитов из периферической крови были выделены МНК у 17 здоровых доноров. Средняя длина теломер исследовалась в CD4+, CD8+ и CD19+ субпопуляциях лимфоцитов. В ходе исследования была выявлена достоверно бльшая средняя длина теломер в В-лимфоцитах в сравнении с СD4+, СD8+ субпопуляциями клеток в группе здоровых доноров (рис.1). Медиана средней длины теломер в В-лимфоцитах на 2,1 т.п.н. больше, чем в СD4+ и на 1,5 т.п.н. в сравнении с СD8+ лимфоцитами.

Рис.1. Средняя длина теломер в лимфоцитах у доноров

Примечание: на диаграмме для каждой переменной отображены: медиана, квартильный размах (25%, 75% процентили), размах (минимум, максимум). * - отличие от CD19+ p<0,01 (критерий Манна-Уитни), п.н. – пара нуклеотидов

При исследовании динамики изменения длины теломер с возрастом была выявлена тенденция незначительного ежегодного укорочения теломер в В-лимфоцитах в сравнении с СD4+, СD8+ клетками (17 п.н., 44 п.н. и 50 п.н. в год соответственно), что не противоречит литературным данным о более медленном темпе ежегодного укорочения теломер в В-лимфоцитах в сравнении с Т-клетками (рис.2).

Рис.2. Возрастная динамика изменения длины теломер лимфоцитов у доноров

Примечание: коэффициент корреляции (r) для CD4+ равен -0,5; r (CD8+)= -0.5; r (CD19+)= -0.1, п.н. – пара нуклеотидов

По-видимому, в основе этого феномена лежит высокая теломеразная активность в В-клетках, которая способствует не только поддержанию длины теломер, но и ее увеличению. Это имеет место при переходе наивных В-клеток в антигенактивированное состояние (центробласты и центроциты герминативных центров) в ходе иммунного ответа [Weng N., 2008].

Вариабельность средней длины теломер в лимфоцитах у здоровых доноров. С помощью данного параметра можно оценить гетерогенность исследуемой популяции клеток по длине теломер и предположить наличие критически укороченных теломер.

В результате проведенного анализа была определена вариабельность, выраженная в единицах флуоресценции (ЕФ), для всей популяции лимфоцитов с последующим их разделением на субпопуляции (табл.1).

Таблица 1

Вариабельность средней длины теломер в лимфоцитах у доноров

Группа исследования Лимфоциты (P25-P75), ЕФ СD4+ ME (P25-P75), ЕФ СD8+ ME (P25-P75), ЕФ СD19+ ME (P25-P75), ЕФ
Доноры, (n=16) Средний возраст 41 (min 24, max 57) 70 (64-75) 62 (57-65) 59 (55-63) 67 (62-71)

Примечание: ME (P25-P75) – медиана и квартили распределения признаков (25-75%), ЕФ – единицы флуоресценции

Как видно из таблицы, у доноров в СD4+, СD8+, СD19+ лимфоцитах вариабельность средней длины теломер практически сравнима, за исключением В-лимфоцитов, которые демонстрировали чуть большие значения ЕФ в сравнении с Т-клетками. Это свидетельствует о более выраженной гетерогенности популяции периферических В-клеток по распределению средней длины теломер, в которой могут присутствовать как клетки с короткими, так и с длинными теломерами.

Исследование возрастной динамики изменения вариабельности средней длины теломер в лимфоцитах, выявило, что данный показатель с возрастом достоверно не изменялся ни в общей популяции лимфоцитов, ни в субпопуляциях (рис.3).

Рис.3. Возрастная динамика изменения вариабельности длины теломер у доноров в субпопуляциях лимфоцитов (в ЕФ)

Примечание:

- - -- - - CD4+, r = 0,1; р = 0,8

—— CD8+, r = -0,1; р = 0,7

———— CD19+, r = -0,1; р = 0,5, где r – коэффициент корреляции, ЕФ – единицы флуоресценции

Средняя длина теломер и ее вариабельность в лимфоцитах при ревматоидном артрите. Медиана средней длины теломер у пациентов с РА в В-лимфоцитах составила 7173 п.н., в СD4+ лимфоцитах- 6899 п.н., в СD8+ лимфоцитах- 6969 п.н. (рис.4). При сравнении полученных значений с донорами было выявлено достоверное укорочение теломер в В-клетках: в СD19+ лимфоцитах у пациентов с РА теломеры короче на 1995 п.н.

Рис.4. Средняя длина теломер в лимфоцитах у доноров и пациентов с РА

Примечание: на диаграмме для каждой переменной отображены: медиана, квартильный размах (25%, 75% процентили), размах (минимум, максимум). * - отличие от группы доноров p<0,01 (критерий Манна-Уитни), п.н. – пара нуклеотидов

Интересно, что уровень длины, который достигали теломеры при укорочении, был практически сравним для всех субпопуляций лимфоцитов, несмотря на исходную гетерогенность по исследуемому показателю. Данный факт, вероятно, является следствием того, что теломеры могут укорачиваться до определенного порогового уровня длины, при котором клетки еще способны оставаться в состоянии функциональной активности. Кроме того, этот пороговый уровень, скорее всего, является примерно одинаковым для исследуемых типов клеток.

При РА темп ежегодного укорочения теломер в В-лимфоцитах ускорялся (36 п.н./год) в сравнении со здоровыми донорами (17 п.н./год) и по своему значению приближался к Т-клеткам (48 и 28 п.н./год для СD4+ и СD8+ лимфоцитов соответственно) (рис.5).

Рис.5. Возрастная динамика изменения средней длины теломер в лимфоцитах при РА

Примечание:

- - -- - - CD4+, r= -0,5; р = 0,05

—— CD8+, r= -0,2; р = 0,5

———— CD19+, r= -0,3; р = 0,3, где r - коэффициент корреляции, п.н. – пара нуклеотидов

Это в свою очередь свидетельствует о неспособности теломеразы полностью компенсировать теломерные потери в условиях активной пролиферации В-клеток при РА.

Анализ вариабельности средней длины теломер выявил достоверное увеличение данного показателя во всех субпопуляциях лимфоцитов при РА (табл.2).

Таблица 2

Вариабельность средней длины теломер в лимфоцитах у доноров

Группы сравнения СD4+ ME (P25-P75), ЕФ СD8+ ME (P25-P75), ЕФ СD19+ ME (P25-P75), ЕФ
Доноры, (n=16) Средний возраст 41 (min 24, max 57) 62 (57-65) 59 (55-63) 67 (62-71)
РА (n=12) Средний возраст 43 (min 20, max 57) 90 (66-104) * 82 (75-95) * 86 (71-100) *


Примечание: ME (P25-P75) – медиана и квартили распределения признаков (25-75%). * - отличие от группы доноров p<0,01 (критерий Манна-Уитни), ЕФ – единицы флуоресценции

Таким образом, при РА Т- и В-лимфоциты будут характеризоваться бльшей, чем в норме гетерогенностью длин теломер на отдельных хромосомах.

Средняя длина теломер и ее вариабельность в лимфоцитах при атопическом дерматите. Данные по средней длине теломер в лимфоцитах представлены в таблице 3.

Таблица 3

Средняя длина теломер в лимфоцитах у доноров и пациентов с АД

Группы сравнения СD4+ ME (P25-P75), п.н. СD8+ ME (P25-P75), п.н. СD19+ ME (P25-P75), п.н.
Доноры, (n=10) Средний возраст 35 (min 24, max 50) 8171 (7085-8572) 8176 (7655-8460) 9828 (8875-10522)
Атопический дерматит, (n=10) Средний возраст 31 (min 20, max 49) 7582 (7028-8694) 7621 (6684-8350) 7602 (7535-8323)*

Примечание: ME (P25-P75) – медиана и квартили распределения признаков (25-75%). * - отличие от группы доноров p<0,01 (критерий Манна-Уитни), п.н. – пара нуклеотидов

Укорочение теломер прослеживалось во всех субпопуляциях лимфоцитов при АД, но достоверно значимое изменение длины теломер было характерно только для CD19+ клеток. Также как и при РА, уровень длины, который достигали теломеры при укорочении, был практически сравним для всех субпопуляций лимфоцитов.

Вариабельность средней длины теломер при АД достоверно увеличивалась в СD4+ и CD19+ лимфоцитах в сравнении с донорами.

Средняя длина теломер в лимфоцитах и ее вариабельность при бронхиальной астме. Пациенты с БА были разделены на подгруппы по форме заболевания в связи с разным характером укорочения теломер в CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитах по результатам предшествующих исследований [Борисов В.И., 2007]. Данные по средней длине теломер в лимфоцитах представлены в таблице 4.

Таблица 4

Средняя длина теломер в лимфоцитах у доноров и пациентов с БА

Группы сравнения СD4+ ME (P25-P75), п.н. СD8+ ME (P25-P75), п.н. СD19+ ME (P25-P75), п.н. Возраст Mean (min, max)
Доноры (n=10) 8171 (7085-8572) 8176 (7646-8460) 9371 (8440-10516) 34 (24, 50)
Атопическая БА 7870 (5861-9049) 7793 (6440-8596) 7959 (7160-9520) 33 (15, 45)
Доноры (n=9) 6866 (6645-7034) 7353 (6830-7655) 8875 (8582-10776) 50 (45, 57)
Инфекционно-зависимая БА 6293 (5441-6542) * 6239 (5340-6660) ** 6645 (6256-6920) * 52 (39, 67)
Доноры (n=10) 6900 (6715-7085) 6967 (6527-8162) 9148 (8582-10776) 40 (24, 57)
Смешанная БА 6455 (5945-7264) 6496 (5893-7197) 7683 (6924-8421) * 39 (22, 62)






Pages:     | 1 || 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.