WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||

Особенности экспрессии изоформ мрнк лейкемия-ингибирующего фактора и фактора стволовых клеток в фетальных тканях и мононуклеарных клетках человека на разных стадиях онтогенеза

-- [ Страница 4 ] --

Учитывая, что SCF играет важную роль в поддержании пролиферативной активности стволовых клеток, а во время пренатального развития высокая активность пролиферации тканевых стволовых клеток регистрируется в тканях зачатков зубов, представлялось закономерным исследовать наличие изоформ SCF в этих тканях. Однако исследование трех образцов этих тканей показало, в отличие от LIF, что только в одном случае обнаружилась экспрессия растворимой изоформы мРНК SCF. Возможно, это объясняется тем, что уровень экспрессии меняется в течение внутриутробного развития и зависит от срока гестации, а так же более строгой тканеспецифичностью альтернативного сплайсинга в изученном компартменте.

Известно, что SCF играет важную роль в процессах сперматогенеза и оогенеза, регулируя активность половых клеток. Поэтому особо важным было изучение альтернативного сплайсинга мРНК SCF в тканях семенников и яичников. Как видно из данных табл. 3, в этих тканях экспрессируется как растворимая, так и мембранная формы SCF, причем уровень экспрессии обеих изоформ в семенниках и яичниках был сопоставим.

Статистический анализ достоверности показал недостоверные отличия между частотами встречаемости экспрессии изоформ мРНК SCF в фетальных тканях. При этом наблюдалась неоднородность экспрессии изоформ в пределах одного организма. В одном случае у плода в тканях печени выявлялась экспрессия обеих изоформ тогда, как у этого же плода в почках была выявлена только растворимая форма SCF. В другом случае у плода наблюдалась выраженная экспрессия обеих изоформ в семенниках в отличие от тканей зачатков зубов, где экспрессии не было обнаружено. Подобные данные свидетельствуют о тканеспецифическом характере регуляции альтернативного сплайсинга SCF и, возможно, о зависимости экспрессии той или иной формы от физиологического состояния плода.

Экспрессия изоформ мРНК фактора стволовых клеток в мононуклеарных клетках человека на разных этапах развития.

На следующем этапе исследований изучались изменения экспрессии мРНК SCF в зависимости от стадии развития организма. С этой целью изучали наличие изоформ мРНК SCF в мононуклеарных клетках крови плодов на 20-22 неделях внутриутробного развития, пуповинной крови новорожденных и периферической крови взрослых.

В изученных образцах МНК плодов выявлялась выраженная экспрессия обеих изоформ мРНК SCF, в то время как в МНК периферической крови взрослых доноров мы не выявили ни растворимую, ни мембранную изоформы. Анализ 13-ти образцов пуповинной крови показал, что в пяти из них экспрессия мРНК SCF была положительной, причем в двух из этих проб обнаруживался фрагмент, соответствующий только мембранной изоформе. Полученные данные суммированы в таблице № 4.

Таблица 4.

Частота встречаемости сплайс-изоформ мРНК SCF в МНК крови на разных этапах онтогенеза.

Изоформы мРНК SCF SCF растворимый SCF мембранный
МНК крови плодов 20-22 недель, N=5 5/5(100%) 5/5(100%)
МНК пуповинной крови новорожденных, N=13 3/13(23,1%) 5/13(38,5%)
МНК периферической крови взрослых, N=15 0/15 0/15
Примечание: числитель дроби – количество выявленных положительных образцов, знаменатель – общее количество образцов.

Статистический анализ достоверности различий встречаемости экспрессии изоформ SCF на разных этапах онтогенеза показал, что снижение частоты встречаемости растворимой изоформы в неонатальном периоде было статистически значимым (p<0,05), в то время как снижение частоты мембранной формы в этот период развития имело характер выраженной тенденции (p>0,05). Несмотря на практически двукратное увеличение экспрессии мембранной изоформы в пуповинной крови по сравнению с растворимой формой (38,5 против 23,1%, соответственно), эти различия были недостоверными.

Наличие изоформ мРНК фактора стволовых клеток в периферической крови в антенатальный и неонатальный периоды и отсутствие их во взрослом периоде объясняется более активными процессами пролиферации и развития во внутриутробный период, а так же переключением органов гемопоэза, миграцией предшественников в костный мозг и преимущественной локализацией клеток-продуцентов во взрослом периоде в тканях. Причем, небольшое преобладание мембранной изоформы в неонатальный период может быть связано с функциональными особенностями мигрирующих клеток, и свидетельствует о различном биологическом значении изоформ. Возможно, преобладание клеток, экспрессирующих эту изоформу, в периферической крови свидетельствует об активной миграции клеток-предшественников гемо- и иммунопоэза, так как в этот период внутриутробного развития происходит процесс переключения с фетального эритропоэза на неонатальный, активно мигрируют клетки-предшественники тимопоэза и стволовые гемопоэтические клетки.

В результате анализа проведенных исследований можно утверждать, что экспрессия сплайс-вариантов мРНК SCF имеет дифференцированный тканеспецифический характер в пределах одного организма и широко распространена во многих типах тканей в пренатальный период развития человека. Частота и спектр экспрессии изоформ мРНК SCF в мононуклеарных клетках крови указывает на стадиеспецифичность экспрессии этого цитокина и наиболее выражены во внутриутробный период и в периоде новорожденности. Это связано, прежде всего, с тем, что с возрастом основная продукция этого фактора происходит в тканях. Результаты исследования экспрессии генов LIF и SCF в фетальных тканях человека показывают, что экспрессия указанных генов происходит с участием альтернативного сплайсинга. В некоторых случаях спектр сплайс-форм мРНК, выявляемый в фетальных тканях, соответствует спектру сплайс-форм, описанному у взрослого человека. Для генов цитокинов характерна тканеспецифичность экспрессии сплайс-вариантов выявляемая как для разных тканей одного организма, так и для одной ткани разных организмов. Исследование экспрессии сплайс-форм мРНК цитокинов в МНК на разных стадиях онтогенеза свидетельствует о значимом вкладе сплайс-вариантов цитокинов в регуляцию гистогенеза.

ВЫВОДЫ

  1. Показано, что экспрессия гена lif в фетальных тканях человека проходит с участием альтернативного сплайсинга с образованием изоформ мРНК LIF-D и LIF-M и имеет качественные отличия в разных тканях, что свидетельствует о тканеспецифическом характере альтернативного сплайсинга этого фактора.
  1. В мононуклеарных клетках периферической крови человека частота встречаемости экспрессии изоформ мРНК LIF снижается в течение онтогенетического развития, что свидетельствует о снижении экспрессии мРНК LIF в этих клетках в онтогенезе.
  1. Продемонстрировано, что экспрессия обеих изоформ мРНК SCF широко распространена во многих типах фетальных тканей человека и имеет разные частоты встречаемости в зависимости от типа тканей, что указывает на тканеспецифический характер экспрессии этого цитокина.
  1. При изучении экспрессии изоформ мРНК SCF в мононуклеарных клетках периферической крови в пренатальный, неонатальный и постнатальный периоды было выявлено достоверное снижение частоты встречаемости мРНК как мембранной, так и растворимой форм SCF, что свидетельствует о снижении активности экспрессии этого фактора в клетках-продуцентах периферической крови в течение онтогенетического развития.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Садовская В.А., Сенников С.В., Останин А.А., Селедцова Г.В., Силков А.Н., Козлов В.А. Онтогенетические особенности экспрессии изоформ мРНК фактора, ингибирующего лейкоз, в фетальных тканях и мононуклеарных клетках человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. – 2009 г. – № 2. – Стр. 85-89.
  2. Садовская В.А., Сенников С.В., Селедцова Г.В., Силков А.Н., Козлов В.А. Особенности экспрессии изоформ мРНК фактора стволовых клеток в фетальных тканях и мононуклеарных клетках на разных этапах развития человека // Клеточные технологии в биологии и медицине. – 2010 г. – № 3. – Стр. 138-141.
  3. Садовская В.А., Самарин Д.М., Селедцова Г.В., Останин А.А., Силков А.Н., Сенников С.В., Козлов В.А. Изучение тканеспецифичности экспрессии альтернативных форм мРНК SCF, LIF в пренатальном периоде развития. // Материалы межрегиональной научно-практической конференции «Дни иммунологии в Сибири». Омский научный вестник. – 2007 г. – №3(61), приложение 2. – Стр. 159.
  4. Садовская В.А., Селедцова Г.В., Останин А.А., Силков А.Н., Сенников С.В., Козлов В.А. Исследование экспрессии изоформ мРНК SCF и LIF в фетальных тканях и в мононуклеарных клетках крови на разных этапах развития человека.// «Российский иммунологический журнал». Материалы Объединенного иммунологического форума, Санкт-Петербург, 2008.– Том 2(11). – №2-3. – стр. 135.


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 ||
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.