WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |

Становление медиаторного этапа нервного аппарата челюстно-лицевой области в пренатальном онтогенезе человека и лабораторных животных

-- [ Страница 2 ] --

Материал фиксировали 12%-ным нейтральным формалином или холодным ацетоном и по стандартной методике заключали в парафиновые блоки, из которых готовили серийные срезы толщиной 10 мкм.

В 5 главе работа носила экспериментальный характер и была выполнена на белых беспородных крысах, содержавшихся в стандартных условиях вивария КазНМУ, то есть при температуре 22 – 24 градуса, естественном освещении, свободном доступе к корму и воде.

Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных, моделирования патологических процессов и выведения их из опыта был составлен в соответствии с рекомендациями ВОЗ.

Перед включением в эксперимент все животные прошли необходимый карантин и подвергались осмотру перед исследованием. Все болезненные процедуры и выведение из эксперимента проводили с использованием нембутала (наркоз в дозах 30-50 мг/кг массы, эвтаназия - 100-150 мг/кг массы, в зависимости от вида животных). Контрольные группы формировались с учетом массы и возраста животных, во всех случаях определены границы биологической нормы для всех тестируемых показателей.

Для получения самок с датированным сроком беременности 3 самки ссаживали с 1 самцом. Первым днем беременности считали день обнаружения спермы во влагалищном мазке. Покрытых самок рассаживали по разным клеткам. В работе использовали эмбрионы первой трети беременности (14, 15, 16,-дневные и новорожденных крысят обоего пола.

2.1.2 Характеристика экспериментальных моделей

Закономерности морфофункциональных преобразований в нервном аппарате ЧЛО и параллельно развивающиеся изменения в тканях и органах-мишенях были изучены в эксперименте с использованием трех моделей ингибирования трансмиттеров.

1 серия модель дефицита ацетилхолина. Для моделирования состояния недостатка ацетилхолина, беременным самкам крыс вводили платифилин в до­зе 0,2 мг/кг массы внутрибрюшинно ежедневно. [Машковский М.Д., 1998, Петров В.И., с соавт., 2002]. 2 серия модель дефицита норадреналина. Для моделирования состояния недостатка адреналина, беременным самкам крыс вводили пропранолол в дозе 0,5 мг/кг массы внутрибрюшинно ежедневно. [Машковский М.Д., 1998, Петров В.И., с соавт., 2002]. 3 серия модель дефицита серотонина. Использовался метод ингибирования ключевого фермента синтеза серотонина – триптофангидроксилазы парахлорфенилаланином (пХФА). Беременным самкам вводили пХФА однократно внутрибрюшинно в дозе 400 мг/кг. Доза была выбрана с учетом литературных данных, свидетельствующих о том, что пХФА в дозе 300-400 мг/кг как у взрослых животных, так и у их плодов вызывает длительное снижение уровня содержания серотонина (до 50-80%). Снижение уровня серотонина происходит постепенно, достигает максимума через 3-е суток и сохраняется пониженным в течение 5-6 суток (Науменко, Е.В., 1971; Попова Н.К. и др., 1975; Keller H.H., 1972; Lauder J.M. et al., 1985).

Животные каждой серии эксперимента делились на группы в зависимости от времени экспериментального воздействия. В первой группе эксперимент начинался на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза. Во второй - на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза.

Гистологическое исследование проводили на 16 сутки эмбриогенеза (Е 16) и в первый день постнатального онтогенеза. В соответствии со временем проведения исследования группы животных во всех трех сериях были разделены на подгруппы.

В качестве контроля использовали блоки ЧЛО потомков соответствующих стадий развития, полученных от матерей, которым вводили физиологический раствор на соответственных сроках беременности. Распределение животных по группам представлено в таблице.

Таблица 2 Характеристика экспериментального материала

Модель эксперимента Вид животного Характеристика группы Характеристика серии Кол-во живот­ных
Дефицит ацетилхолина Крысы Группа сравнения контроль 10
1 группа Экспериментальное воздействие на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза 14 сут. пренатального онтогенеза 11
15 сут. пренатального онтогенеза 11
16 сут. пренатального онтогенеза 11
1 сутки постнатального онтогенеза 9
2 группа




Экспериментальное воздействие на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза
14 сут. пренатального онтогенеза 10
15 сут. пренатального онтогенеза 10
16 сут. пренатального онтогенеза 10
1 сутки постнатального онтогенеза 9
Дефицит норадреналина Крысы Группа сравнения контроль 10
1 группа Экспериментальное воздействие на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза 14 сут. пренатального онтогенеза 11
15 сут. пренатального онтогенеза 11
16 сут. пренатального онтогенеза 11
1 сутки постнатального онтогенеза 9
2 группа Экспериментальное воздействие на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза 14 сут. пренатального онтогенеза 10
15 сут. пренатального онтогенеза 10
16 сут. пренатального онтогенеза 10
1 сутки постнатального онтогенеза 9
Дефицит серотонина Крысы Группа сравнения контроль 10
1 группа Экспериментальное воздействие на 9 сутки (Е9) пренатального онтогенеза 14 сут. пренатального онтогенеза 11
15 сут. пренатального онтогенеза 11
16 сут. пренатального онтогенеза 11
1 сутки постнатального онтогенеза 9
2 группа Экспериментальное воздействие на 13 сутки (Е13) пренатального онтогенеза 14 сут. пренатального онтогенеза 10
15 сут. пренатального онтогенеза 10
16 сут. пренатального онтогенеза 10
1 сутки постнатального онтогенеза 9
Всего животных 273

Биохимическая верификация деплеции нейротрансмиттера проведена во всех сериях экспери­ментов.

2.1.3 Методы исследования

При морфологическом исследовании тканей ЧЛО бы­ли использованы общепринятые методики с окрасками гематоксилином и эозином, кармином (по Бесту), по Фельгену, Суданом III и нильским голубым. В двух последних случаях использовали свежезаморожен­ные срезы. Исследование нервной ткани было дополнительно проведено при окраске по Нисслю, серебрением после фиксации в растворе Буэна.

Полученные микропрепараты были описаны, с типичных из них - из­готовлены микрофотограммы. Фотосъемка препаратов проведена с использованием мультиголовочного микроскопа «Leika» (Швейцария) на кафедре патологической анатомии и судебной медицины КазНМУ. В дальней­шем съемка сочеталась с количественным морфологическим исследовани­ем. Морфометрическое исследование было проведено в соответствии со сложившимися принципами системного количественного анализа [Автандилов Г.Г., 1996,2002].

Для прямого морфометрического исследования был использован компьютерный комплекс «Морфотест» (Россия). Он включал в себя бинокулярный исследовательский микроскоп «Leika», аналого-цифровой преобразователь, компьютер с высокоразрешающим цветным принтером и программное обеспечение.

Морфометрические исследования были также проведены в ядросодержащих и проводящих структурах нервной системы. В ка­честве показателей состояния нейронов были выбраны средний объем ядер (мкм3), объемная доля ядер (мкм3/мкм3) и площадь поверхности ядер (мкм2). Для характеристики нервных структур использовали такие по­казатели, как относительный объем (мкм3/мкм3) и плотность осевых цилин­дров (на 1 мм сечения) и среднее сечение осевого цилиндра (мкм2).

Флуоресцентногистохимические и цитоспектрофлуориметрические методы:

Использовали метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М.Крохиной для выявления медиаторспецифичных нервных элементов в криостатных срезах блоков ЧЛО эмбрионов крыс.

Флуоресцентно-гистохимический метод А. Бъерклунда в модификации В.Н.Швалева и Н.И. Жучковой (1987) с использованием глиоксиловой кислоты для выявления нейромедиаторов в нервных волокнах на криостатных срезах блоков ЧЛО.

По замерам интенсивности флуоресценции можно судить о количественном содержании (концентрации) катехоламинов (Гордон Д.С. и др., 1982; Виноградов О.Ю., 1989; Scheuermann W., Stach W.,1987).

Для выявления холинергических нервных окончаний материал обрабатывали по методу Карновского – Рутс.

Выявление хромаффинной ткани по Визелю (Wiesel).

В результате окраски по Визелю хромаффинные клетки окрашиваются в зеленый цвет, а остальные клетки (строма, нервные клетки) - в синеватый цвет.

Сопоставление пренатального развития крысы и человека

При проведении сравнительного анализа морфометрических данных пренатального онтогенеза человека и белых беспородных лабораторных крыс необходимо было соотнести между собой дни развития их организмов.

Для этого мы воспользовались методом, предложенным О.А. Гелашвили (2007).

2.1.4 Математическая обработка полученных данных

Статистическая обработка проведена общепринятыми для медико-биологических исследований методами с помощью программных пакетов. При регрес­сионном анализе выявлены наиболее значимые показатели, определение которых целесообразно для оценки влияния концентрации материнских нейротрансмиттеров на выраженность повреждения тканей ЧЛО.

Корреляционный анализ проводился методом простых парных кор­реляций Спирмена. Особое внимание уделяли корреляциям между показателями выраженности нарушений в нервном аппарате и морфометрическими показа­телями в тканях развивающейся ЧЛО (ось «тяжесть — гистопатология»). Достоверными счита­ли корреляции с показателем r, по модулю большим 0,66 [Платонов А.Е., 2000; Петри Л., Сабин К., 2003].

2.2 Изучение частоты и структуры ВПР ЧЛО в Республике Казахстан

В соответствии с поставленными целью и задачами, на первом этапе нами была изучена распространенность и структура врожденных пороков развития в Республике Казахстан за период с 2000 - 2009 гг. Частоту рождения определяли в интенсивных показателях - на 1000 живорожденных. Был изучен вклад пороков развития челюстно-лицевой области в структуру ВПР за исследуемый период. Исследование проводилось ретроспективно, путем изучения официальных статистических данных Минздрава РК, публикуемых в «Сборнике статистических показателей» ежегодно, изучения источников Медицинского информационно-аналитического центра (МИАЦ), путем анализа материалов отчетности главных стоматологов областей РК.

Далее был изучен спектр и динамика пороков развития челюстно-лицевой области за период исследования. Источник информации оставался прежним.

В исследовании нами использовалась Международная классификация болезней 10-го пересмотра (МКБ-10).

2.2.1 Клинические методы обследования

Клиническое обследование детей с ВПР ЧЛО проводилось в четырех регионах РК.

Под наблюдением находились 174 ребенка в возрасте от 1 до 10 лет. Группу сравнения составили 90 детей, не имевших врожденных пороков развития ЧЛО того же возраста.

Таблица 3 - Распределение обследованных по полу и возрасту.

Возраст в годах Основная группа Группа сравнения
1 - 4 56 30
5 – 6 57 30
7 – 10 61 30


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.