WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 || 3 |

Лёгочнойлокализации

-- [ Страница 2 ] --

2 группа (группа сравнения) – биопсийный иоперационный материал,полученный от 60 больных с морфологическиверифицированным нейроэндокриннымраком лёгкого (45 случаевмелкоклеточного рака и 15 случаев крупноклеточногорака).

3 группа (контрольная) -операционный материал, полученный от 50 больныхс морфологически верифицированнымнеэндокринным раком лёгкого(плоскоклеточный рак – 30 пациентов,аденокарцинома лёгкого – 20пациентов).

Морфологическоеисследование фрагментов ткани опухоли, фиксированных 10%забуференнымформалином, включало в себямикроскопическое исследование серийныхсрезов окрашенных рутинным способом(гематоксилин-эозин) и с применениемиммуногистохимического(ИГХ) метода.Для гистологическогоисследования материала использовалитрадиционный метод парафиновой заливки.Проводка материала осуществлялась втканевом процессорекарусельного типа MicromSTP120.

Иммуногистохимическоеисследование осуществляли на срезах спарафиновых блоков иммунопероксидазным методом постандартной методике (Buchwalow I. B. etal., 2010). Серийные срезытолщиной 3-4 мкм наносили на стекла садгезивным покрытием (поли-L-лизин). Предварительную температурнуюдемаскировку антигенов производилисогласно инструкциям к антителам с помощьюавтоклава Pascal фирмы «DAKO». Процесс иммуногистохимическогоокрашивания производили в автостейнереAutostаiner Plus фирмы «DAKO».

Использовалиследующийнабор маркеров: Ki-67 (клон MIB-1),Bcl-2, Вах, р53,CytokeratinAE1/AE3, Cytokeratin 7, Cytokeratin 18, Epithelial Antigen Ber-Ep4,EMA, ThyroidTranscriptionFactor, c-kitCD 117, S-100, CD68, Synaptophysin, Chromogranin A, CD56, CD57,NSE, E-Cadherin, CD44, AMACR (производствофирмы «DAKO»).В качествевторичных антител применяли смесьбиотинилированныхантикроличьих и антимышиныхиммуноглобулинов(EnVision™ FLEX System фирмы «DAKO»), длявизуализации места связыванияантигена сантителом использовалиметку — фермент пероксидазухрена вприсутствиисубстрата – пероксида водорода и колориметрического реактива3,3-диаминобензидина(набор DAB+, «DAKO»).

Дляоценки характера экспрессииИГХ-маркеровразработанаспециальная шкала оценки,учитывающаякакколичествопозитивных клеток, так и интенсивностьокрашивания. Привыявлении S100-позитивныхподдерживающихклеток учитывали площадь покрытияткани опухоли сетьюподдерживающих клеток. Индекспролиферации Ki67 вычисляли как среднее от числаокрашенныхядер на 100учтенных ядер (при учете 10 полейзрения приувеличении х400 дляоперационногоматериала).

Чувствительностьиспецифичностьмаркеровнейроэндокриннойдифференцировкирассчитывали каксоотношение числа опухолей с положительнойэкспрессией маркера к количеству всех исследованныхобразцов (положительной расценивалиэкспрессиюна 3-5 баллов). Присравнительной оценке экспрессиирегуляторов апоптоза использованкоэффициент апоптоза (КА),представляющий собой соотношение Bcl-2-позитивныхклеток к Вах-позитивнымклеткам.

Для оценкимежгрупповых различий значений признаковприменяли ранговый U-критерий Вилкоксона—Манна—Уитни. Анализзависимости между признаками проводили спомощью критериев 2 и Фишера.Критический уровень достоверности нулевойстатистической гипотезы (об отсутствиизначимых межгрупповых различий илифакторных влияний) принимали равным0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯИ ИХОБСУЖДЕНИЕ

Морфологическаяхарактеристикакарциноидов лёгкого. Средний возрастбольных скарциноиднымиопухолями лёгких составил 51,8 года,причем средний возрастмужчин былнесколько ниже, чем женщин (46 лет и 54,4 годасоответственно).Соотношение мужчин и женщин –1:2. Установлено, что для типичных карциноидовс центральной локализациейхарактеренпреимущественнополипообразный эндобронхиальныйрост опухоли(76%), а для атипичныхкарциноидов – смешанный рост, при которомопухоль частично погружаласьв тканьлёгкого за пределыстенки бронха (64%). Среднийразмер опухолевого узла при типичномкарциноиде – 2,66см, при атипичном– 3,55см. В типичныхкарциноидах митозы отсутствовалив 97% случаев,среднее количество митозов составило 0,16на 2 мм. В атипичных карциноидахсредняя митотическая активностьсоставила 1,76 на 2мм, некрозы выявлены в 53% случаев.

Диагностическаяэндоскопическая бронхобиопсиябыла выполнена у79% больныхс карциноидными опухолями. В большинствеслучаев (80,5%)установлен диагноз карциноидабез уточнения степенидифференцировки. В 8% случаевошибочнодиагностированнейроэндокринный рак, в2,5% – рак неэндокриннойприроды, в 4%–другаянеэпителиальнаяопухоль. В 5%выставлен диагноз нейроэндокриннойопухолинеопределеннойстепенизлокачественности.Таким образом, приморфологическойдиагностикенаибольшую трудность представляетопределение степени злокачественностикак карциноидов, так и НЭО в целом.

Экспрессия маркеровнейроэндокриннойдифференцировки Экспрессиюнейроэндокринныхмаркеров вкарциноидах лёгких определяли с использованиемнескольких антител: синаптофизина,хромогранина А, нейрон-специфическойэнолазы (НСЭ), CD56(NCAM) и CD57(Leu-7).

Самымичувствительными маркераминейроэндокриннойдифференцировкиприменительно к карциноидамлёгкогооказалисьхромогранин А исинаптофизин,частота экспрессии НСЭ, CD56и CD57 была несколькониже. Отмеченорезкоеснижение чувствительностихромогранина и CD57в нейроэндокринных карциномах,тогда какразница вхарактере экспрессии синаптофизинаи НСЭне стользначительна,а маркерCD56имеет тенденцию к повышениюиммунореактивности в более злокачественныхНЭО (рис.1).

 Чувствительность нейроэндокринныхмаркеров вНЭО -0





Рис.1.Чувствительность нейроэндокринныхмаркеров вНЭО различной степени злокачественности,(%).

Установлено, что все изученныемаркеры, кроме НСЭ,обладают достаточной специфичностью.Внеэндокринныхлегочных карциномахинтенсивнаяположительнаяреакция вбольшом количестве клетокопухоли наблюдалась только при использованииэтого маркера. СпецифичностьНСЭ составила 66%, тогда как хромогранина 100%,синаптофизина 94%, CD56 иCD57 – 92%.При сравнении экспрессиинейромаркеров наразличныхклинических стадиях статистическизначимых различий не выявлено.

Экспрессия нейроэктодермального маркера S100.Выраженная«параганглиоидная» сеть из S100-позитивныхподдерживающих клеток выявлена только в типичныхкарциноидах, причем далеко не во всех опухолях (16% – 12из 73). Вбольшинстве случаев карциноидыдемонстрировали лишь отдельныеподдерживающиеклетки (56%ТК и 29%АК),либо полноеих отсутствие.Кроме того, экспрессия S100определялась и в основныхклетках опухоли: в 35%(26 из 73)типичныхкарциноидови в 26% (8из 31) атипичных выявлена положительнаяреакция сэтим маркеров вбольшинстве или частиопухолевых клеток. Зависимостимежду экспрессией S100вразличных опухолевых структурах иклинической стадией неустановлено. В нейроэндокринномраке S100-позитивныхподдерживающихклеток невыявлено,однаконепосредственно в клеткахопухоли экспрессия отмечалась в небольшомколичестве случаев.

Присутствиеподдерживающихклеток болеехарактерно для типичных карциноидовлёгкого, нежели для атипичных. Также следуетотметить, что экспрессия S100 может присутствоватьне тольков поддерживающих, но и в основных клеткахкарциноидныхопухолей.

Экспрессия эпителиальныхмаркеров.Оценку экспрессии эпителиальных маркеров вкарциноидах лёгкихпроизводилисиспользованием первичных антителкпанцитокератину (панЦК),клонАЕ1\АЕ3,цитокератину(ЦК) 18,эпителиальному мембранному антигену ЕМА,эпителиальному антигену Ber-Ep4.

ЦитокератинАЕ1/3, цитокератин 18 иэпителиальныйантиген Ber-Ep4 в отличие от ЕМАдемонстрируютвысокий уровень экспрессии в карциноидныхопухолях.Выраженнаяэкспрессияцитокератина АЕ1/3 выявлена в 78% карциноидов,цитокератина 18 – в 97%, Ber-Ep4 – в 76%. Следует отметить,что высокозлокачественныеНЭО характеризуются снижением экспрессиипанцитокератина,лишь 53% опухолей интенсивноэкспрессируют этот маркер. Кроме того, выявлены различия влокализации экспрессии цитокератиновв карциноидах инейроэндокринныхкарциномах. Нейроэндокринныеопухоли часто демонстрируютперинуклеарную экспрессиюЦК ввиде крупныхгранул, чтопозволяетзаподозрить их природу (Rodney T. et al.,2004). Понашим данным, такаяиммунореактивностьчасто встречается в нейроэндокринномраке, однаков карциноидах этот эффект выявлен в небольшом количестве случаев (рис.2). Какой-либозависимости характераэкспрессииэпителиальныхмаркеров от стадии процесса вкарциноидныхопухолях не установлено.

Примечание: ПГ-перинуклеарныегранулы, Ц-цитоплазматическая экспрессия.

Рис. 2. Зависимость характера экспрессиицитокератинов от степени злокачественностиНЭО.

Небольшое количество (8%) всех карциноидовне экспрессировало АЕ1\3. В таких случаях для дифференциальнойдиагностикинеобходимоиспользоватьдополнительныемаркеры. Наиболее пригоднымидля этихцелей являютсяцитокератин 18 и эпителиальныйантиген Ber-Ep4.

Экспрессия органоспецифических маркеров. Длявыявленияпервичногоочагаприметастазированиииспользуютсяразличныеорганоспецифическиемолекулы.Длялёгкого такими маркерами можно считать цитокератин 7(ЦК 7)итиреоидныйфактортранскрипции(TTF-1).

Цитокератин 7. Экспрессия цитокератина 7большинством клеток опухоли выявлена в 24,6 % (18 из 73) случаевтипичного карциноида, 29% (9 из 31) атипичногокарциноида. В 27% (20 из 73) ТК и 26% (8 из 31) АК выявленыотдельные позитивные клетки, а в 20,5% (15 из 73) и 16% (5 из 31) соответственноэкспрессия ЦК 7отсутствовала. ВвысокозлокачественныхНЭО процентположительнойэкспрессии ЦК 7 также достаточно низок: в 21,6% наблюдаласьреакция сбольшинством клеток, в 31,6% – счастью, в 15%–единичные позитивные клетки.

Тиреоидный фактортранскрипции (TTF-1). Ядерная экспрессия TTF-1наблюдалась в 4 случаях (13%) атипичного карциноида,а при типичномкарциноидеположительнаяреакция невыявленани воднойиз исследованных опухолей. Срединейроэндокринныхкарцином лёгкого 63% опухолейдемонстрировалиинтенсивнуюэкспрессию TTF-1 большинствомклеток опухоли.

Такимобразом, экспрессия TTF-1 вбольшей степени характернадлянизкодифференцированныхнейроэндокринных опухолей лёгкого, нежели для карциноидов(р<0,001).Приоценке экспрессии ЦК 7и TTF-1 вкарциноидах на различныхклиническихстадиях значимых закономерностей не выявлено.

Экспрессия молекулмежклеточной адгезии (Е-кадгерин и CD44).Экспрессияадгезивныхмолекул втипичных иатипичныхкарциноидахлёгкогосущественно не различается – чаще всего отмечаласьинтенсивная мембранная реакция (рис.3). Срединейроэндокринныхкарцином около половиныслучаев былинегативными.Увеличение размеров опухоли и метастатическогопотенциалакарциноидовсопровождаетсяснижением экспрессии адгезивныхмолекул (табл.2).

 Рис3. Экспрессияадгезивных молекул в НЭО лёгкого -2

Рис3. Экспрессияадгезивных молекул в НЭО лёгкого в баллах, .

Таблица 2

Экспрессия адгезивныхмолекул вкарциноидах лёгкого взависимости от размераопухоли иналичия метастазов

Статусопухоли Е-кадгерин p CD44 р
5 баллов <5баллов 5 баллов <5баллов
T-статус T1 64 3 <0,05 67 0 <0,05
T2 28 9 29 8
N-статус N0 82 6 <0,05 87 1 <0,05
N1-2 10 6 9 7


Pages:     | 1 || 3 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.